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液相色谱（LC）

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主题：【讨论】UPLC的骗局

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发表于：2014/09/21 18:56:33 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

本文基于百度文库中的一篇文章，不正确之处请各位指出。文章地址：

http://wenku.baidu.com/link?url=l8tXB7WupnZFa3QmRkuY3SJSGOrdOH6aimBpjGAHRUdbEZnZsK2z6iEJq0dv5o3MW2vGmGBwrJhk9CiKQrwg9RUrqEn7vKEtFlF3nGdPprW

骗局1：伪高压

以WATERS为例。Waters的UPLC可用100 MPa (1,000kgf/cm²)的耐压时，送液泵的流量到1 mL/min．比其大的流量范围，即1～2 mL/min时，耐压只可用到50 MPa (500kgf/cm²) ―― 主要依据“压力与送液泵流量成正比”，因此流量越大，越需要高耐压，但Waters的UPLC在送液泵流量1 mL/min以上时，系统耐压规格下降一半。为此，Waters的UPLC是不完全的系统。

骗局2：高压下，分离恶化

使用高压LC时，Waters的销售宣传中的所谓“于一般粒径5μm色谱柱相比，未损害分离，分析时间缩短至1/9”，可用说理论上是正确的。

但是，看一看应用于实际分析的例子，分析时间确实缩短至1/9，但是可以说进行了未损害分离的分析吗？好像未必可得到所期待的结果。看一下Waters的分析例，有许多分离受到损害的例子，未能获得如其理论那样的结果，理由之一是“在色谱柱内部产生的摩擦热” ―― 在一般的LC中不会造成问题，但在高压条件下，流动相通过色谱柱内部时，在流动相和填充剂之间产生大量的摩擦热。并且，摩擦热引起色谱柱内部的温度偏差，其结果，峰产生扩散，分离恶化．可能是这个原因，看看Waters的分析例，在能保持分离的状态下的快速化，其实力不是缩短至1/9而只是1/4左右．但是，Waters一律未提及这种不充分的分离．只是分析标准样品的话，姑且不论，而在实际样品的分析中，因杂质的干扰多，这样不充分的分离可以说是致命的．这不仅是Waters的UPLC的问题，也是Agilent的1200系统的问题。

比如，食品领域的分析完全可以说是从杂质成分峰中分离目的成分的分析，因此，很难采用诸如Waters的UPLC、Agilent的1200系统的高压LC。

骗局3：分离不充分时，调整空间几乎不存在，且柱溫箱存在明显缺陷

原文如下：

使用高压LC进行了快速分析，但峰的分离不充分时如何是好呢？

一般可想到的措施有“利用长色谱柱提高分离”。但是，此时分离虽然提高了，但压力也上升了 ―― Waters、Agilent的高压LC在高压条件下进行分析，装置不能承受更高的高压，因此不能采用“长色谱柱”

其此，可想到的措施是“减小色谱柱填充剂的粒径，提高分离”。但是，进一步缩小粒径在技术上是困难的，而且，由于粒径的微细化，压力上升，则超过系统的耐压，因此也不能采用这个方案。

这样，Waters、Agilent的高压LC因进行快速分析而出现分离不充分的结果，但无法解决 ――这在理论上已经很明确，但如果说出来事实，则必须摘下“高压・快速LC”的招牌，因此Waters、Agilent选择沉默。

Waters、Agilent在销售宣传中说在“色谱柱填充剂的微细化(2μm以下的填充剂)”的延长线之上还有“色谱柱的高温化”，即在高温分析中高压LC是必须的．但是，“通过色谱柱高温化进行的快速分析”这是即使是一般的LC也可应对的方法。

本来，所谓“通过色谱柱填充剂的微细化实现快速分析”和“通过色谱柱的高温化实现快速分析”是以不同途径实现快速化，而Waters、Agilent却拿UPLC、1200系统的延长线之类的话来说事，其理由无非是躲开“依靠高压的快速・高分离是有极限的”这一事实。

【高压LC的问题：铝模块加热式柱温箱的缺点】

Waters的UPLC、Agilent的1200系统采用铝模块加热式的柱温箱．但是，这个类型的柱温箱不能高精度均匀地温控整个色谱柱，因此，在应用像高温分析这样强烈依靠温度的分析方法时，可以说很难得到期待的分离 ―― 在色谱柱内部产生温度偏差，其结果，峰产生扩散，分离悪化．比如，Agilent介绍了通过高温化进一步实现快速化的分析例．但是，从这个数据求出理论塔板数，则本来应该提高的理论塔板数反而比高温化前低．

这可以理解为在高温分析中的铝模块加热式柱温箱有极限．从很重视温度控制的GC采用空调式柱温箱来看，比起铝模块加热式柱温箱，空调式柱温箱具有高精度．

骗局4：UPLC不能使用整体柱、严重牺牲LC基本性能，高压下存在耐用性差等问题

以下为部分文章：

作为快速LC的特征，还有峰的响应性快．为追随快速地出峰，必须提高LC系统的响应性，但提高响应性则噪声增大．有关Waters的UPLC的灵敏度，宣传「与一般粒径5μm色谱柱相比，灵敏度提高3倍」，但未触及S/N比．这是因为灵敏度虽然提高了，但噪声也增大了，所以不能说S/N比． Agilent的1200系统，为提高LC系统的响应性，推荐从流路拆除送液泵的阻尼器和混合器．但是，拆除送液泵的阻尼器和混合器时，就会发生基线噪声增大或混合不充分的梯度结果． Agilent的1200系统缩短了检测池的光程．通过缩短光程可降低噪声，但信号强度的下降的更多，因此，其结果引起S/N比的下降．如上所述，高压LC牺牲了一般LC应有的基本性能．

比如，自动进样器中的六通阀是要求具有坚固性的部件．

一般，六通阀的耐久性能依存于技术规格上所规定的最大压力．并且，采用同样转子密封材质的六通阀，技术规格上的最大压力越高，维护频率增加．

转子密封的寿命(耐磨损性能)取决于六通阀制作时的闭紧压力，而不取决于分析时的送液压力．这是因为，无论是否进行流动相送液，在阀制作时调整的闭紧压力一直加载在转子密封上．为此，即使在低压下连续使用高压LC，寿命也不会延长．并且，装置的耐久性低则维护频率增加 ―― 高压LC时，用户难以自己进行维护，甚至消耗品的替换也需依赖于厂家．

于是，修理等待天数以及修理期变长，等待用户的是「以实现分析工作快速化为目的引进装置，装置不能运转的天数却增加了」这样讽刺的结果．并且，发生了以往本来不需要的维护费用．

Agilent1200系统，耐压为60 MPa (600kgf/cm²)，六通阀的维护频率与Waters的UPLC差不多 ―― Agilent的1200系统以及Waters的UPLC，六通阀的寿命都只有5,000次分析．

骗局5：高压LC的问题：无论作为MS前端装置的LC还是作为一般的LC都不合格

原文如下：

只要不解决「交叉污染大」的问题，即使可以进行快速分析，也没有资格作为MS前端装置的LC ―― 这是因为越是像MS这样的高灵敏度，就越不能忽视交叉污染的影响．

并且，只要不解决「进样重现性差」，「分离不充分」，或「得不到充分的S/N比」等问题点，即使可以进行快速分析，作为一般的LC也是没有资格的―― 按照已有的LC合格的试验法进行分析时，因装置性能低，有可能变为不合格．

Waters和Agilent宣传UPLC和1200系统这样的高压LC「可用于一般的LC分析」，但在这种言辞背后隐藏了「但是，不能得到一般LC的基本性能」的事实．

这样，Waters、Agilent的姿态是，为了实现快速化，「基本性能即使与日立、日本分光等厂家的一般LC一样也没关系」．

该帖子作者被版主 zhaohua8011加 3积分， 2经验，加分理由：鼓励讨论！

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johnblacke

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2014/9/22 0:29:30 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

呵呵，就等宇宙真理LC了。

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2014/9/22 0:29:48 Last edit by johnblacke

老多_小多

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2014/9/22 10:06:59 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主是做什么的，能从理论角度透析

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vip_pis

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2014/9/22 10:27:24 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主的质疑很精辟！一针见血！
但是你只是注意到UPLC和普通HPLC相比，在分离上的各种劣势，却没有真正了解UPLC的具体使用用户的使用要求。实际上真正使用UPLC的用户基本都不太要求分离程度好坏，他们使用UPLC就像工厂的流水线一样，成熟的方法、成熟的样品、成熟的报告，无所谓分离不充分、S/N比和进样重现性。拥有几百套watersUPLC的中国最大的CRO公司药明康德就是最典型的例子。真正做研发、质检的实验室基本都是HPLC、UPLC、LC/MS搭配使用的。
再有就是你如果全盘相信销售的话，那你肯定花了很多冤枉钱！

该帖子作者被版主 zhonghuashendun加 2积分， 2经验，加分理由：讨论有论点

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chemist_zm

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2014/9/22 10:35:39 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

wuxiapptec没有那么多waters uplc吧控制成本他们还是agilent和shimadzu
再说waters的服务是cro公司很难忍受的。

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johnblacke

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2014/9/22 11:05:29 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 vip_pis(vip_pis) 发表:
楼主的质疑很精辟！一针见血！
但是你只是注意到UPLC和普通HPLC相比，在分离上的各种劣势，却没有真正了解UPLC的具体使用用户的使用要求。实际上真正使用UPLC的用户基本都不太要求分离程度好坏，他们使用UPLC就像工厂的流水线一样，成熟的方法、成熟的样品、成熟的报告，无所谓分离不充分、S/N比和进样重现性。拥有几百套watersUPLC的中国最大的CRO公司药明康德就是最典型的例子。真正做研发、质检的实验室基本都是HPLC、UPLC、LC/MS搭配使用的。

再有就是你如果全盘相信销售的话，那你肯定花了很多冤枉钱！

呵呵，药明康德几百套Waters UPLC，呵呵。2010年以前药明康德就没UPLC。

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2014/9/22 11:08:00 Last edit by johnblacke

yangxiao8403

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2014/9/22 11:24:16 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

分析的不错，学习了

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vip_pis

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2014/9/22 11:58:31 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 johnblacke(johnblacke) 发表:
原文由 vip_pis(vip_pis) 发表:
楼主的质疑很精辟！一针见血！
但是你只是注意到UPLC和普通HPLC相比，在分离上的各种劣势，却没有真正了解UPLC的具体使用用户的使用要求。实际上真正使用UPLC的用户基本都不太要求分离程度好坏，他们使用UPLC就像工厂的流水线一样，成熟的方法、成熟的样品、成熟的报告，无所谓分离不充分、S/N比和进样重现性。拥有几百套watersUPLC的中国最大的CRO公司药明康德就是最典型的例子。真正做研发、质检的实验室基本都是HPLC、UPLC、LC/MS搭配使用的。

再有就是你如果全盘相信销售的话，那你肯定花了很多冤枉钱！

呵呵，药明康德几百套Waters UPLC，呵呵。2010年以前药明康德就没UPLC。

你现在可以去看看，可能几百套他们说的有点夸张，但是几十套是肯定有的，纠结这个那你就本末倒置了！

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