主题：【第十一届原创】【检测故事】我的中秋月饼中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸检测故事

                                              【活动】【原创中秋测】我的中秋月饼中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸检测故事
样品：各类月饼
检测项目：山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜脱氢乙酸
仪器条件：Waters e2695 ；色谱柱：Waters  T3/250*4.6mm；检测器：PDA 230 nm  柱温：35 ℃；进样量：20 μL        流速：1.0 mL/min
流动相：A:甲醇  D:0.02 mol/L醋酸铵水
Time(min)        0.0        10        10.1        15.0        15.1        20.0
        A%              8        8          50            50            8            8
样品处理：称2.0 g样品于50 mL离心管中，加入30 mL水均质提取1min，转移至50mL比色管中，含蛋白质样品加入5 mL 106 g/L亚铁氰化钾和5 mL 220 g/L乙酸锌沉淀剂（不含蛋白质不必加入沉淀剂）加入5mL甲醇，再加水定容到50 mL，摇匀，倒入50mL离心管，4000r/min离心5min(必要时取少量15000r/min高速离心)，取上清液过0.45μm水系滤膜，上机检测


标准使用液配制记录：

样品空白与混合标液2.0ug/mL堆栈色谱图：

样品加标与样品堆栈色谱图：

该样品的脱氢乙酸含量为：0.12g/kg（GB2760-2014规定为小于等于0.5g/kg），合格。
回收率计算：（称取2.0g样品，加入混合标液100ug/mL1.0mL定容至50mL，加标浓度为0.050g/kg，理论上机浓度为2.0ug/mL）
安赛蜜：102.5%、苯甲酸：76.0%、山梨酸：114.5%、糖精钠：96.5%、脱氢乙酸：95.5%；
另一月饼的检测：
混合标液光谱图：

月饼检测的光谱图：

该样品的山梨酸经光谱图验证后不是山梨酸，下面重点说下苯甲酸，该样品苯甲酸为0.03g/kg，依据GB2760-2014规定：月饼及月饼馅料中的苯甲酸均为不得使用，那是不是这个月饼样品就不合格呢？
GB2760-2014中是这样规定带入原则的：
1.4 带入原则
1.4.1在下列情况下食品添加剂可以通过食品配料（含食品添加剂）带入食品中：
a) 根据本标准，食品配料中允许使用该食品添加剂；
b) 食品配料中该添加剂的用量不应超过允许的最大使用量；
c) 应在正常生产工艺条件下使用这些配料，并且食品中该添加剂的含量不应超过由配料带入的水平；
d) 由配料带入食品中的该添加剂的含量应明显低于直接将其添加到该食品中通常所需要的水平。
1.4.2当某食品配料作为特定终产品的原料时，批准用于上述特定终产品的添加剂允许添加到这些食品配料中，同时该添加剂在终产品中的量应符合本标准的要求。在所述特定食品配料的标签上应明确标示该食品配料用于上述特定食品的生产。
2 食品添加剂的使用规定
2.1表A.1列出的同一功能的食品添加剂（相同色泽着色剂、防腐剂、抗氧化剂）在混合使用时，各自用量占其最大使用量的比例之和不应超过1。
2.2表A.3规定了表A.2所例外的食品类别，这些食品类别使用添加剂时应符合表A.1的规定。同时，这些食品类别不得使用表A.1规定的其上级食品类别中允许使用的食品添加剂。
那会不会是什么月饼原料带入的呢？


那会不会是调味糖浆带入的呢？因为调味糖浆有允许使用的苯甲酸，限量为1.0g/kg，
向生产企业要月饼生产的配料表：


果然，这个月饼配料中有使用调味糖浆啊，这个GB2760的判定真的是有点防不胜防啊，不仅要会检测，而且还要会知道有哪些可能是由哪些原料带入的啊。
结论：1、GB 5009.28-2016标准的液相方法样品经水提取,高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白,GB/T 5009.140-2003标准中对于汽水是先加热出去二氧化碳，然后取2.5mL稀释10倍上机检测，对于可乐、果茶、果汁类饮料是吸取2.5mL加20mL水稀释，离心，上清液过中性氧化铝柱，流动相洗脱、收集25mL作为上机检测液。GB 5009.28-2016液相色谱法采用GB/T 23377-2009法，标准中果蔬汁全部过柱；我们是如果有干扰才过柱。2、标准全部用超声波提取；我们是除去黄油类、果汁类，其他一般用均质提取，效率，回收率都能大大提高。3、过柱步骤，最后用水稀释上机，峰形好，标准方法峰形不好。
2、沉淀剂主要用于需除蛋白的样品，如肉酱，酱油，酱菜等；如上层有油层，则吸取中间清液；
3、四种混合标准中间溶液应用流动相配置（试验中发现用水配置，苯甲酸、山梨酸不稳定）
4、GB 5009.28-2016标准中提到当存在干扰峰或需要辅助定性时,可以采用加入甲酸的流动相来测定,如流动相:甲醇+甲酸-乙酸铵溶液（2mmo l / L甲酸+2 0mmo l / L乙酸铵）=8+92。 
5、防腐剂在GB2760中的带入原则要慎重考虑，以免误判。