(一)分析背景及色谱条件
红霉素是一种十四元大环内酯类抗生素,一直是临床上治疗革兰氏阳性菌感染的重要药物,半个世纪以来为人类提供了一条安全高效的用药途径。经过不断研究人们相继开发出了耐酸性好的第二代红霉素和不易引起细菌耐药性的第三代红霉素。
阿奇霉素可以说是目前第二代红霉素中最具有活力的大环内酯类抗生素,其生产步骤简单,在国内外都具有很大的生产量,尤其在国内,在许多药厂都有生产。但与其它第二代大环内酯类抗生素相比阿奇霉素的HPLC分析一直是个难点,这也与其独特的十五元环结构有关系。而且我们经过试验发现不同色谱柱对其检测的结果差别很大,普通的C18柱无法保证效果,C18 BDS的色谱柱的检测结果也不是很好,我们尝试了几种不同的在C18柱基础上经过各种填料处理的色谱柱,其中包括了“极限”系列的色谱柱。
阿奇霉素分子式
色谱条件:磷酸氢二钾盐水溶液与乙腈以45:55混合。检测波长210纳米,柱温30°C,流速1.0ml/min,进样量50微克。
阿奇霉素样品取自上海某药厂提供的产品,其纯度在95%以上。
色谱柱我们共尝试了五根:
(1)普通C18柱,编号为1;
(2)某品牌BDS C18柱,编号为2;
(3)大连某国产色谱柱,编号3;
(4)日本某色谱柱(药检所推荐)。编号4;
(5)Ultimate XB-C18色谱柱,编号5.
(二)试验结果
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
主峰时间 拖尾因子不对称度半峰宽 理论塔板数 杂质分离度
1 18.432 4.856 7.258 0.653 4409 ——
2 16.780 1.455 1.704 0.420 8844 0.452
3 18.620 1.038 1.039 0.417 11067 ——
4 28.995 1.231 1.449 0.583 13698 1.860
5 27.392 0.744 0.475 0.582 12306 1.172
(三)分析与讨论
(1)对于两种主要杂质的显示情况,1和3只能显示出一种。4对它们的分离度最好,5次之。
(2)从主峰阿奇霉素的峰型来看3最好,4,5次之。
(3)关于主峰也就是阿奇霉素的出峰时间,4,5明显晚于前三个色谱柱。关于不同厂家不同批次的阿奇霉素我们已做过很多实验,绝大多数杂质出峰都在阿奇霉素之前,而且种类很多,也就是除了本实验所测样品显示的这两种主要杂质之外还存在有很多杂质,理论上讲主峰出峰时间晚有利于前面杂质峰的分离。
总结起来,从初步的对比检测中发现Ultimate XB-C18色谱柱对阿奇霉素杂质检测的情况还是很令人满意的,甚至不亚于药检所推荐使用的色谱柱。我们准备继续进行一系列的分析实验,对几种较难分离的杂质进行对比分析。