主题：【资料】图谱来找茬(第五季)---柱效我来测【板油解析详解】

板油解析如下：


一般测试柱效怎么去操作，如果没有标准测试样品，你会怎么做？你大概什么时候会测一次柱效？
可以用自己日常做的样品，在相同的色谱条件下进样。看看分离度和理论塔板数。就基本上可以断定柱效。
柱效我一般根据理论塔板数和分离度来判断
一般用标准品进样后，根据公式计算或者直接用工作站的软件计算出理论塔板数。一般不测，除非按照某些标准测含量时，上面对理论塔板数有要求，才会去测。
一般测试柱效都是按买新柱子的测试报告方法去测试。
一般按公司内部的操作规程做，现在工作站上就会显示塔板数，一般1个月测试一次
我一般不用标准品，就用我们平时要检测的东西（偶是做蛋白的，超级郁闷呢），这样比较有针对性。。有时候用标准品（大多都是小分子的）柱效还是好好的，但是样品已经分不开了，测试过程很简单，调出方法，进样走一遍，报告上就有理论塔板数出来了。
没有标准，可以用苯和甲苯，对于反相柱；感觉不理想的时候。
一般测试柱效都是按买新柱子的测试报告方法去测试。
一般不测，能达到药典要求的柱效就可以了。
一般会对每天使用的对照品做一个塔板数的连续跟踪，对照品如果出现塔板数的明显下降，在样品的峰型上基本都能反映出来了，因为对照品一定会进，基本就可以观察柱效，对于复杂样品，就查看其目标成分的分离度和峰宽之类，比较能找到问题。
实验室常准备一些萘，一定用色谱柱出厂检测的色谱条件来检测，这样才有可比性。
一般按厂家柱效测试方法测试，无标准测试样品，就选择其它比较稳定的、常用的已知各种测试条件的标准品，稀释相应浓度进行测试。
我们 用苯,甲苯,苯甲酸做混合物做为标样,来检测柱效.这些化合物比较容易得到,成本很低, 就是说毒性有点大.
用萘、苯、甲苯等标准品都可以测柱效，其中萘是比较便宜而且毒性较小的，但最好还是用我们常测的样品来测。觉得异常时再测。
按色谱柱生产厂家提供的测试报告条件测试。如果没有，就参照同类型的色谱柱测试方法。新柱子会测一下，用久了效果不好了再测试。
一般用供应商提供的方法和物质来测定色谱柱的柱效，没有标准物的话，就看平常做的样品峰形的变化，一般我们的色谱柱都是项目专用的，现在的工作站都可以显示理论塔板数，多长时间测定柱子的柱效，还是根据色谱柱的使用情况来定的。

此图谱中由于选用了不恰当的色谱条件，故柱效很低，请问提高柱效有哪些方法？按照要求柱效（理论塔板数）达到了多少说明柱子基本“报废”？
可以改变流动相的组成。还有柱温的控制。
提高柱效的方法，呵呵，转一个口诀：第一柱子温度能调高，第二可选柱子内径小。第三柱外体积小更妙，第四使用超纯的硅胶。第五氘灯要选能量高，第六采用中空透光灯。第七改变有机相比率，第八流动相pH可鼓捣。第九可把键合相选挑，第十改变有机添加剂。十一改变流动相配比，十二缩短检测响应时间。
具体理论塔板数到多少报废，还真没有关心过。
此图谱中提高效果可以改善色谱条件。提高的方法有很多，比如处理色谱柱、活化等。
不过我再加一条，就是加长柱子，好比加相同填料的预柱，原来150MM的改成250MM的等等和柱子初始测试报告相比较，柱效严重下降说明色谱柱该报废
主要是因为保留时间太长，扩散增大造成的峰展宽。
改变流动相种类或比例，或采用梯度洗脱缩短目标峰的保留时间。
显然可能流速太低，导致50分钟峰展宽，或许不是柱效低。如果测试柱效到几百了，基本报废。
可在流动相中加入改性剂（如酸或盐等）改善峰的形状，如果相同条件的两根柱子峰型相差较大，峰型较差柱子柱效降低了，应处理或报废更换。
此图谱中提高效果可以改善色谱条件。提高的方法有很多，比如处理色谱柱、活化、程序升温、采用柱或阀切换技术等
R<1.5，柱子就要重新处理或报废。
反向柱：提高柱温，减小柱径，缩短检测器的响应时间，使用高纯硅胶，改变流动相PH值，改变有机相%，改变键合相，改变流动相配比方式，改变有机添加剂。
基本“报废”的条件根据柱效不好确定，因为首先要确定是不是由于其他原因导致的柱效下降或经柱子再生柱效也不能提高，如果不是上述原因，柱效（理论塔板数）只有药典要求的一半或以下说明柱子基本“报废”。
提高柱效的方法已经从楼上的口诀中学到很多，不一定只看塔板数的，有时候走对照品还有8000的塔板数，样品怎么也分不好，说不定走对照品只有5000的塔板数的柱子做样品却比较好，多方面考虑都不行了，再生、拆了填、再不行才报废（没办法比较穷，不影响检测效果的时候还是可以考虑这些方法的）
按照要求是应该测试色谱柱的理论塔板数。当柱子的理论塔板数低于一定指标（理论塔板数反映了柱效率，一般来说理论塔板数越大，色谱的分离能力越强。计算公式为
式中：tR是保留时间；ω1/2是半峰宽。从图中可以计算得出苯的理论塔板数2218，甲苯的理论塔板数4846。　　分离度是表示色谱柱在一定色谱条件下对混合物综合分离能力的指标，其定义为2倍的峰顶距离除以两峰宽之和，即
　　当R=1时，两峰的峰面积有5％的重叠，即两峰分开的程度为95％；当R=1.5时，分离程度可达到99.7％，可视为完全分离。苯和甲苯的分离度达到了6.325，可见两峰完全分离，分离效果较好。）
具体要看是分析什么化合物了。一两万都不奇怪。不过，分离物质不是光看柱效的，即使2万个塔板数，没有选择性，分离度一样不行。
通过对图形的分析，谱图中有两个地方说明分析条件不是很好 在前面的几个峰分离度不是很好，最后一个峰出峰峰型不好，说明流速和流动相的比率都需要调整，具体的调节就要结合楼主原有的条件。
从谱图看前两个大峰峰性不错，最后一个峰出风时间较长峰形拖尾，如果是反向色谱，可以加一点柱温，可能改善分离。调节流动相PH，分离度都大于1.5，可以调节一下流动相比例，多加点有机相，或采用梯度洗脱。
这样品,组分1,组分2与组分3极性相差比较大.方法一,可以用缓冲盐做改性剂来试试改变保留值.但效果不一定好,方法二,用梯度可以比较好的分离3中组分.效率比较高.
从前两个峰来看色谱柱的柱效应该是没有问题，第三个峰的问题是是出峰太晚，应该通过以下方法改变一下：
（1）、改变流速，流速增大峰会提前变窄。
（2）、改变流动想PH值。
（3）、采用梯度。
（4）、用短一点的柱子。
由于第一、二两个峰出的比较靠前，所以改变上述条件不会对这两个峰有太大的影响。
通过改变流动相种类及配比，调节柱温、流动相流速，调节流动相PH等手段都可以提高柱效。一般在正常情况下，也就是条件较为合理的情况下，柱效低于1000了，就基本上不行了。
改变色谱条件，等度可以考虑用梯度，换流动相条件改善峰型，选择合适的流速。
改变流动相的比例吧，后面的峰极性太小了，采用梯度吧，如何改变喝的看你用的色谱柱，如果是小粒径的柱子，提高流速才会提供柱效。

一般买新柱子的时候你都会亲自测试一下柱效还是直接看下厂家柱子测试报告

一般是从日常测样中来判断。
一般不测柱效，可能是我们买的柱子都是Waters或者Agilent的缘故（领导喜欢），所以比较信得过这些品牌。
一般买新柱子的时候不做测试。
我们是自己测试，按公司内部方法和厂家柱效测试报告上的条件各测试一遍。
新柱子我们一般会自己测一下，以后出了问题也好拿出数据让老大买新的。
亲自测，但没有能达到其报告的柱效的，而且低不少。
一般买新柱子不测试，直接看下厂家柱子测试报告。
一般买新柱子的时候不做测试。
亲自测试样品看实际柱效。
会试 然后做登记 记录
一般买新柱子的时候都是直接看下厂家柱子测试报告。
不通的色谱柱有不同的测试方法，来自不同厂家的同类色谱柱也往往采用不同的测试条件，所以最好按照色谱柱说明书中的测试报告测定柱效。
新色谱柱看牌子，以我的经验正规渠道购进大厂的色谱柱，迪马、安捷伦、菲罗门、出厂报告都没问题。但是包装奇怪的就要小心了。我就用过假的YLT柱子你按着出厂报告的条件做一下柱效，也差不多，但是柱压在短时间内就升很多。现在山寨货很多。
看下厂家柱子测试报告，然后用类似方法测试。
我们是用,苯 ,甲苯, 苯甲酸混合物做测试,与以前的数据对比,并记录数据,以便下次测柱效时对比.
一般在新买来柱子收货的时候会测一次，厂家会提供方法，并且工程师也会协助测试，并记录下图谱，以便以后做对比。
如果条件允许，一般会测一下。
我们一般买了柱子直接用，如果一开始用就觉得不好的话，就换货，用了那么多柱子，一般情况下都没什么问题。

好贴，支持！！

好帖，收益非浅！

猪哥哥太帅了，3Q

很有道理，楼主很有才！

好啊！学习啦！

通常采用日常分析的样品做对照，如果分离度明显降低，柱效下降，如果分析条件不满足，要么报废，要么对柱子进行再生，看看情况，好则用，不好则报废。

柱效是快速判断色谱柱是否正常的方法，非常有用，只是现在很多人没有注意到，实验室扔了一大堆色谱柱，都不知道哪些好哪些坏