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原文由 tyys98(tyys98) 发表:
HPLC也会“感冒”？
HPLC是我硕士期间的研究方向，到现在已经用过很多不同型号了，应该说比较熟悉吧，然而今天却遇到一件很蹊跷的现象，S老师的研究生小李向我抱怨说，前段时间用来分析氨基酸的实验条件出现问题，有两种成分分离不开了，尝试过很多调整，包括流动相的配比、梯度表的修改、长时间的淋洗平衡等等都无济于事，不知道问题出在哪里，万般无奈下甚至都想过要更换色谱柱重新建立条件。
我先调出了以往的结果，与最近的图谱进行了仔细比较，发现18种氨基酸中只有位于中部的苏氨酸和甘氨酸发生了重叠，其余成分的分离效果基本没有发生显著改变且重现性较好，这些现象基本可以排除输液泵以及切换阀工作性能不稳定的理由。问题出在哪里呢？从两种成分的化学结构来看，柱温度的的改变有可能会影响两者的相对位置，然而小李说柱温的设定并无差错，一直都是40度。这时我忽然想到了天气！这几天寒流过境，室内温度也随之下降，有可能会导致恒温柱箱中的实际温度受到影响。苏氨酸较甘氨酸分子量更大，对温度变化更敏感，降低温度会使保留时间延长，色谱峰后移并与甘氨酸重叠。如果是这样，我们把柱温箱的温度升高1度应该可以观察到效果，果然，在41度下两者有了明显的分离趋势，再作调整很快得到了满意的分离结果。
我经常对学生们讲，科学研究的对象是自然规律，有时候它好像很不听话，这时候需要我们仔细的观察和思考，然后通过试验向它发问，而它们的那些表现其实就是在向你回答，如果稍不留意就错过最佳的对话机会。例如这一次就是仪器通过图谱告诉我们：它“感冒了”需要保暖，很高兴我听明白了。然而下一次呢？
（本文曾发表在我的博客：http://tonic.blog.sohu.com/）[/center][/center]
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