主题：【分享】二次制备，真的很神奇！（图文并茂的）

原文由 xiongbb(xiongbb) 发表:

原文由 chromkiller(chromkiller) 发表:
身边有人问我楼主在说什么，我站住来得瑟一下：
1、哥们第一次用反相，没分开，流动线还加盐了，这个盐如果浓缩完了就是新的杂质。对不？
2、哥们又把第一次反相制备的东西收集了，其实这是一个混合物（2组分的），是吧？
3、LZ又用了HILIC色谱来分前面的2组分混合物（宣传你们家的材料的吧，你们的论坛，你们咋说都行），与反相的保留机理不同，整开了。
4、盐，磷酸盐，不保留，在死时间就流出了，所以顺道除盐了。

拍一个砖：如果是长链的离子对试剂，如SDS，LZ你咋办？

首先我没看懂楼主的帖子，因为不是很懂制备，我先来结砖呀，如果使用sds，可以不可以选择甲醇沉淀一下呢？

顺便在丢一砖，lz用的第一根柱子是10μ，第二次是5μ，第二根柱子分离度3.8， 是不是如果第一根柱子选择了5μ的柱子，样品就分开了呢？ 至于填料可以选择hilic的5μ呢？貌似用的仪器也不同，哪个仪器犀利呢，拉出来溜溜

一般不会选择沉淀除盐，因为既然选择离子对试剂，说明样品也是离子的可能性比较大；而且，沉淀方法容易产生共沉淀，就是把要的东西也一块弄没了；
第一次制备可以用10um的，也可以用5um，很遗憾，5um的也没有分开；不过即便分开了，也是含盐的，也需要二次制备，而且，上样量会大大下降了。
第二根柱子其实是可以试试10um的，分离度太大了，可是实验室恰好没有10um的半制备柱，所以就杀鸡用牛刀了。

制备液相的话，我一向不认为仪器之间会有多大差异，国产仪器已经很好用了，前提别老坏就行，剩下的就是功能多少的差异了。

原文由 jhs_1122(jhs_1122) 发表:
建议铁柱总结一下，得出个简单明了的结论，好让我们这些做制备做的少的人学习学习

原文由 阿怪(zz831024) 发表:
看你的质谱，二次制备出来的也纯不到哪里去啊~~

原文由 yuhou_xiexie(yuhou_xiexie) 发表:

原文由 chromkiller(chromkiller) 发表:
身边有人问我楼主在说什么，我站住来得瑟一下：
1、哥们第一次用反相，没分开，流动线还加盐了，这个盐如果浓缩完了就是新的杂质。对不？
2、哥们又把第一次反相制备的东西收集了，其实这是一个混合物（2组分的），是吧？
3、LZ又用了HILIC色谱来分前面的2组分混合物（宣传你们家的材料的吧，你们的论坛，你们咋说都行），与反相的保留机理不同，整开了。
4、盐，磷酸盐，不保留，在死时间就流出了，所以顺道除盐了。

拍一个砖：如果是长链的离子对试剂，如SDS，LZ你咋办？

感谢哥们提出这么尖锐的问题。

1.流动相不挥发的话，浓缩完就是新的杂质，没错。
2.对，其实至少是三个杂质，还有缓冲盐；
3.HILIC的材料的确很好用的，可以试试，不是吹的；HILIC不但与反相的机理不同，与正相的机理也不同的；离子交换？有一点点，但不全是，具体，哥们搞不明白。
4.这个问题提的好，SDS或者辛烷磺酸钠，尽量不要用，如果非要用，HILIC 也可以试试；不行的话，就上阴离子交换了；
呵呵，哥们才疏学浅，瞎说了。

原文由 xiongbb(xiongbb) 发表:

原文由 yuhou_xiexie(yuhou_xiexie) 发表:

原文由 chromkiller(chromkiller) 发表:
身边有人问我楼主在说什么，我站住来得瑟一下：
1、哥们第一次用反相，没分开，流动线还加盐了，这个盐如果浓缩完了就是新的杂质。对不？
2、哥们又把第一次反相制备的东西收集了，其实这是一个混合物（2组分的），是吧？
3、LZ又用了HILIC色谱来分前面的2组分混合物（宣传你们家的材料的吧，你们的论坛，你们咋说都行），与反相的保留机理不同，整开了。
4、盐，磷酸盐，不保留，在死时间就流出了，所以顺道除盐了。

拍一个砖：如果是长链的离子对试剂，如SDS，LZ你咋办？

感谢哥们提出这么尖锐的问题。

1.流动相不挥发的话，浓缩完就是新的杂质，没错。
2.对，其实至少是三个杂质，还有缓冲盐；
3.HILIC的材料的确很好用的，可以试试，不是吹的；HILIC不但与反相的机理不同，与正相的机理也不同的；离子交换？有一点点，但不全是，具体，哥们搞不明白。
4.这个问题提的好，SDS或者辛烷磺酸钠，尽量不要用，如果非要用，HILIC 也可以试试；不行的话，就上阴离子交换了；
呵呵，哥们才疏学浅，瞎说了。

hilic的对物质的保留分3种，非极性、极性、离子； 至于第4点不是认同，不一定非要是阴离子交换，也许样品是弱碱性呢，类似于三聚氰胺，就是要阳离子交换，对吧？

原文由 yuhou_xiexie(yuhou_xiexie) 发表:

原文由 阿怪(zz831024) 发表:
看你的质谱，二次制备出来的也纯不到哪里去啊~~

不懂三重四级杆的质谱，只知道两个化合物相同参数下，谱图不同，就不是一个东西；帮忙分析一下？

原文由 阿怪(zz831024) 发表:

原文由 yuhou_xiexie(yuhou_xiexie) 发表:

原文由 阿怪(zz831024) 发表:
看你的质谱，二次制备出来的也纯不到哪里去啊~~

不懂三重四级杆的质谱，只知道两个化合物相同参数下，谱图不同，就不是一个东西；帮忙分析一下？

你这两个样品中都有535和573的峰，而且含量都不少，一个是准分子离子峰，一个是加钾峰，所以其实这两个样品在制备时是没有很好的分离开来。

原文由 yuhou_xiexie(yuhou_xiexie) 发表:

原文由 xiongbb(xiongbb) 发表:

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原文由 chromkiller(chromkiller) 发表:
身边有人问我楼主在说什么，我站住来得瑟一下：
1、哥们第一次用反相，没分开，流动线还加盐了，这个盐如果浓缩完了就是新的杂质。对不？
2、哥们又把第一次反相制备的东西收集了，其实这是一个混合物（2组分的），是吧？
3、LZ又用了HILIC色谱来分前面的2组分混合物（宣传你们家的材料的吧，你们的论坛，你们咋说都行），与反相的保留机理不同，整开了。
4、盐，磷酸盐，不保留，在死时间就流出了，所以顺道除盐了。

拍一个砖：如果是长链的离子对试剂，如SDS，LZ你咋办？

感谢哥们提出这么尖锐的问题。

1.流动相不挥发的话，浓缩完就是新的杂质，没错。
2.对，其实至少是三个杂质，还有缓冲盐；
3.HILIC的材料的确很好用的，可以试试，不是吹的；HILIC不但与反相的机理不同，与正相的机理也不同的；离子交换？有一点点，但不全是，具体，哥们搞不明白。
4.这个问题提的好，SDS或者辛烷磺酸钠，尽量不要用，如果非要用，HILIC 也可以试试；不行的话，就上阴离子交换了；
呵呵，哥们才疏学浅，瞎说了。

hilic的对物质的保留分3种，非极性、极性、离子； 至于第4点不是认同，不一定非要是阴离子交换，也许样品是弱碱性呢，类似于三聚氰胺，就是要阳离子交换，对吧？

我说的阴离子交换是针对像SDS或辛烷磺酸钠这样的长链离子对试剂而言，用阴离子交换树脂，可以出去磺酸根离子，达到除盐的目的；如果是弱碱，或者短链或者无链的三聚氰胺，不是这个讨论的范围了；但你做过三聚氰胺？佩服佩服！以后还请多多指教。

原文由 xiongbb(xiongbb) 发表:

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原文由 yuhou_xiexie(yuhou_xiexie) 发表:

原文由 chromkiller(chromkiller) 发表:
身边有人问我楼主在说什么，我站住来得瑟一下：
1、哥们第一次用反相，没分开，流动线还加盐了，这个盐如果浓缩完了就是新的杂质。对不？
2、哥们又把第一次反相制备的东西收集了，其实这是一个混合物（2组分的），是吧？
3、LZ又用了HILIC色谱来分前面的2组分混合物（宣传你们家的材料的吧，你们的论坛，你们咋说都行），与反相的保留机理不同，整开了。
4、盐，磷酸盐，不保留，在死时间就流出了，所以顺道除盐了。

拍一个砖：如果是长链的离子对试剂，如SDS，LZ你咋办？

感谢哥们提出这么尖锐的问题。

1.流动相不挥发的话，浓缩完就是新的杂质，没错。
2.对，其实至少是三个杂质，还有缓冲盐；
3.HILIC的材料的确很好用的，可以试试，不是吹的；HILIC不但与反相的机理不同，与正相的机理也不同的；离子交换？有一点点，但不全是，具体，哥们搞不明白。
4.这个问题提的好，SDS或者辛烷磺酸钠，尽量不要用，如果非要用，HILIC 也可以试试；不行的话，就上阴离子交换了；
呵呵，哥们才疏学浅，瞎说了。

hilic的对物质的保留分3种，非极性、极性、离子； 至于第4点不是认同，不一定非要是阴离子交换，也许样品是弱碱性呢，类似于三聚氰胺，就是要阳离子交换，对吧？

我说的阴离子交换是针对像SDS或辛烷磺酸钠这样的长链离子对试剂而言，用阴离子交换树脂，可以出去磺酸根离子，达到除盐的目的；如果是弱碱，或者短链或者无链的三聚氰胺，不是这个讨论的范围了；但你做过三聚氰胺？佩服佩服！以后还请多多指教。

不懂，如果使用离子交换类柱子，干嘛还要离子对试剂，不理解制备呀！俺是做乳制品行业的。