主题：【第六届原创】双歧杆菌之扫描电镜照片

浏览0 回复12 电梯直达

省部重点实验室

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2011/12/01 17:19:55 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

维权声明：本文为gl19860312原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

拍摄时间：上个月

样品名称：双歧杆菌

双歧杆菌 Bifidobacterium是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌，末端常常分叉，故名双歧杆菌。
双歧杆菌是人体中非常重要的有益菌（见附录）。大豆低聚糖是双歧杆菌的营养物质，还可抑止有害菌的生长，又被称为双歧杆菌增殖因子（双歧因子）。大豆低聚糖还有一个很好的性质，即它不易被胃吸收分解，大部分可进入肠道做为双歧杆菌的营养，因此糖尿病人也可食用。大豆低聚糖市场有卖。
酸奶中含双歧杆菌，但绝大部分会被胃酸杀死。市场上还有双歧杆菌药品，也存在同样的问题。据说有些双歧杆菌药品采用特别技术，加上一层保护，使双歧杆菌可通过胃进入肠道。

双歧杆菌具有能清除自由基及过氧化脂质的能力，因而能够延缓细胞的衰老，起到延年益寿的作用。除此，双歧杆菌能非特异性地提高机体的免疫力，提高抗感染的能力，也有利于健康和长寿

由于细菌的细胞比较小，光镜下很多结构应该是看不太清楚的，鞭毛、芽孢、荚膜正常都看不见适当染色后芽孢和荚膜能看见，鞭毛不行。因为普通光镜的话四十倍之后就是一百倍的油镜了，看动物细胞一般用四十倍的，但是细菌大概是动物细胞的十分之一吧，想看清楚就得用电子显微镜了。、、

人眼能分辨的最小长度大约是0.1毫米
而细菌的一般直径约0.5微米，长度约0.5~5微米。（1微米=1000纳米）
当然有例外，有一种纳米比亚嗜硫珠菌直径达0.32~1.00毫米（1毫米=1000微米）；已知最小的细菌“纳米细菌”直径约50纳米。
0.5微米*200=0.1毫米。也就是说，你将细菌的直径放大200倍大概可以看清了，可是这并不是常见的光学显微镜

一、细菌培养:双歧杆菌（实验室自己分离出来一株）

将菌种接种在优化以后的GAM液体培养基中，置厌氧工作站（BUG BOXnerobic Workstation）培养。见菌液均勺混浊，涂片。

Ruskinn厌氧工作站操作指南及使用注意事项(Bug Box)

一、常规操作

1、检查仪器是否正常（温度、气体压力、水槽水位等）。

2、若需照明可按下控制面板Chamber Light照明开关或踩下SPOT脚踏。

3、温度调节：按FN键→按▲▼调节到所需温度→按FN键直到仪表显示为实际温度和设定温度。

4、袖套使用：

（1）进入工作腔：涂滑粉→检查气路旋钮（选择单手或双手操作）→将手伸入袖套→踩下VAC脚踏抽气至双手有轻微紧绷感→踩下GAS脚踏充气至适量→逆时针旋转密封盖旋钮至松动→抓住密封盖横杆旋转至水平位置→往里轻推打开密封盖→缓缓伸手将密封盖置于两侧支架上。

（2）关闭密封盖：缓缓伸手取下密封盖→将横杆水平方向对准袖套操作口轻轻外拉，旋转至垂直位置，松开横杆→顺时针旋转密封盖旋钮（不可过紧）→确认工作腔已密封，取出双手。

5、转移闸使用：

（1）放入样品：确认内门已关闭→往里推按钮，打开外门→放入样品架及样品→关闭外门→按下面板Interlock Purge键或踩下LOCK脚踏，Interlock Active指示灯亮，（仪器自动进行转移闸清洁），10秒钟后指示灯熄灭→通过袖套操作口打开内门，放入样品。

（2）取出样品：确认外门己关闭→确认转移闸己进行自动清洁（否则按下面板Interlock Purge键或踩下LOCK脚踏清洁转移闸）→打开内门，放入样品→关闭内门，打开外门，取出样品（重复取出样品时，切记每次操作均需进行转移闸清洁）。

6、单皿转移系统操作：将密封口螺丝拧松→放下密封板→将平板迅速塞入系统。

7、常规操作注意事项：

（1）工作腔内操作动作必须轻缓。

（2）每天均需确认水槽处于满水位。

（3）建议每周检查橡胶附件，如有必要应进行清污和涂滑粉处理。

（4）尽量使用厂家提供专用清洁剂和专用无淀粉滑粉。

（5）请务必注意保护袖套，操作前确认已修整过指甲，已取下戒指、手表等物。

（6）确认压力表读数约0.2—0.35Mpa。当气瓶压力下降时，仪器报警，更换气瓶时务必分清气体种类，并检查管道连接和钢瓶不应漏气。

（7）遇断电或仪器特殊情况需关机2小时以上时，应拧松袖套密封盖以防温度下降后水槽中的水倒吸入工作腔内。（防止钯催化剂潮湿，影响使用寿命。）

（8）脚踏SPOT的强光照射功能仅适用于短时间样品观蔡，不可踩下太久，以免影响灯泡寿命或导致仪器顶盖过热。

（9）建议仪器常年连续工作（即使1-2周不用，也不推荐关机）。若确需长期关机，请取出催化剂和去毒匣密封干燥保存，并对水槽排水。

（10）若样品量较少，建议在工作腔内放置2-3个装满蒸馏水的敞口瓶，维持湿度，以防止培养基干裂。

（11）实验结束请及时关闭工作腔内的照明灯以延长灯管使用寿命。

二、首次使用或长期关机后重新启用

1、检查单皿转移系统、袖套操作口、转移闸内外门等橡胶附件是否密封良好。

2、将催化剂和去毒匣正确放置在工作腔底部固定槽内。

3、水槽加水至满水位。

4、正确连接气体钢瓶：蓝-纯N2（99.99％），红-10％纯H2（99.99％）＋10％纯CO2（99.99％）

＋90％纯N2（99.99％）。

5、调整气体压力至约0.2—0.35MPa，方法如下：关闭减压阀（逆时针旋转到底）→打开钢瓶阀门→打开减压阀缓缓增加压力至所需压力。（切记压力绝对不可超过0.8MPa，否则将导致仪器损坏。）

6、打开电源，设定温度，（如有必要可更改湿度设定值，出厂默认75-80％RH），再次检查气体压力。

7、适当拧松袖套口密封盖形成一定缝隙，Gas Demand指示灯亮，通H2-N2混合气约20分钟后关闭，以排除工作腔内的空气。（也可适当缩短通气时间，但可能导致工作腔温度和湿度额外升高，甚至形成大量液滴影响实验操作，温度和湿度随后可自动稳定）。

8、仪器开机后建议平衡6-7个小时投入正常使用。

9、仪器请勿直接置于空调出风口以免影响温度稳定或在腔内产生冷凝水影响实验操作。

二、标本制作:

1.将双歧杆菌液体培养液进行离心9000rpm

2.弃去上清，用XX戊二醛对其固定2小时

3.用pH7.4磷酸盐缓冲液漂洗2~3次

4.YY亚铁氰化钾混合液固定2小时

5.梯度酒精脱水

6.树脂包埋后用超薄切片机切成薄片。

三、电镜观察:

SEM samples
were observed using a Japan's Hitachi Company S-570 scanning electron microscope.

显微镜厂家及型号：西北大学分析检测中心
放大倍数：见片片