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主题：【分享】【转】色谱柱中的流动相会排干吗？等相关问答

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发表于：2012/06/23 23:47:03 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

色谱柱中的流动相会排干吗？（不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？）

不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

建议将问题改成这样提法：
1、对泵有没有损害？
2、损害的部位是哪里？
3、如果损害后，怎么处理？
4、怎样避免这种情况发生？

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2012/6/23 23:47:43 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

现在许多高效液相色谱仪都具备自保功能，当流动相吸干了，HPLC系统会自动停止工作，如HP1100。但是有些较老型号的HPLC仪并不具备这种功能，泵依然会不停运转，的确，泵不能输送空气，但是在运转的时候可以保持泵前后空气的连贯性，所以色谱柱中是否排干流动相取决于安装的位置，如果流动相瓶和泵都高于色谱柱，且柱后端低于柱前端，色谱柱中的流动相会非常缓慢的从柱中流失，至于是否能排干所有的流动相，要看这种情况保持的时间。
当柱的某一端发生干涸后，固然可以通过小新的办法弥补，但是终归会对色谱柱造成伤害，柱效会有所降低，所以尽量避免出现干涸的情况。

高效液相色谱柱是比较娇贵的东西,尽管将流动相排干可以补救,但最好不要那样做,有一次不小心流动相用光了,结果柱压急剧下降,基线波动很大,害我脱了好长时间气才搞定.所以当柱压或基线有问题是有可能是有气泡或流动相不足.

建议将问题改成这样提法：
1、对泵有没有损害？
2、损害的部位是哪里？
3、如果损害后，怎么处理？
4、怎样避免这种情况发生？

１　如果不是缓冲盐作流动相，对泵没什么损害．
２　如果时间不是很长，对柱子的损害也很微小，
　　我们实验室出现过几次类似的情况（＞半小时），柱子没什么问题
　（当然，发现后要用脱气良好的甲醇或乙腈除去柱中的空气）．
３　如果时间过长（具体多长还没试过），最坏的结果就是柱头干裂，处理的方法：或是把柱头重新添一下（一定要找很专业的人士修补！），或是牺牲柱效将就着用，或是花钱换柱子．
４　避免此种情况不同的实验室采取的方法也不同，主要是责任心和实验管理的问题．刚买来的仪器都是宝贝，恨不得吃睡都在一起，发生此种情况的几率几乎为０．　时间长了，就不好说了，要是实验室管理不善或实验者责任心不强，那就要靠运气了．　

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2012/6/23 23:48:27 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1、对泵有损害，主要是柱塞的密封圈，特别是用盐（磷酸盐易结晶）
2、对一般柱没太大影响，如果是做糖、氨基酸的离子交换柱只要进一点气泡就麻烦了，你要举着柱尾慢慢排气，这种柱子流速低
3、不要一来就用甲醇冲，先取下柱了，用水把泵弄好了再用甲醇冲，有机溶济加盐溶液更易结晶，2的柱子可不能用有机溶济！
4、重新装柱头其实也容易，打开柱头后（有的是打不开的：luna），挖去＜0.5cm，要齐。然后加上新的，如果挖太多不要一次加满，先封上柱头用甲醇冲压一下，再加一层填料。最后一层定要平，不然峰型不好。我一直自己补，单然仅限于C18。补充一点，柱子一定要从管路取下后放个半个小时，有时柱内压力有点高，一打开柱头填料就自己出来了。
5、设定压力下限可避免该情况发生

1、2一般大多数泵都会停止运行，因为泵只排液相，不排空气（压力为0），如果流动相中含盐，会析出，对泵会有一点损坏；对柱子方面没有多少损坏；如果泵不停止运行，对柱子损坏，会有气泡产生
3、如果流动相是盐，先用水或含一定量的异丙醇把泵头冲洗，再把柱子接上冲洗；如果柱子进了气泡，a.一般用脱气的纯流动相调大流速，短时间冲洗 b.或者减小流速长时间冲洗，并把柱尾抬高点。
4、一般如果泵可以设定压力下限可以防止，如果不能设定的，只有人为“看护”来了

1.储液瓶中流动相会空，但柱子中绝对不会。空气的压缩系数很大的，泵头在来回压缩空气，不会把空气压进柱中。
2. 柱子一般在存放过程中内部变干，有可能产生断层，影响以后使用或报废。
3.泵空流动相后，泵头进气，再加流动相后可能不泵液，purge不管用，有时需要拆下止逆阀用注射器打进液体排气。

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2012/6/23 23:49:01 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

色谱柱的正确使用和维护是十分重要的，稍有不慎就会柱效降低，缩短寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
（1）避免压力和温度的急剧变化以及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处突然掉下来都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
（2）一般来说色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲去除柱头的杂质。否则反冲的话，会迅速降低柱效。
（3）选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前连接一预柱，分析是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱前被硅胶饱和，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
（4）避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱，也有浸透限制固定相短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
（5）经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混容的溶剂逐渐过渡，每妙种流动相的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正己烷，二氯甲烷和甲醇依次冲洗，己烷使硅胶表面重新活化。如果下一步分析程序的流动相不含缓冲液，那么可以省略最后用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗取残留的非极性杂质，在甲醇冲洗时重复注射100－200μl 四氢呋喃数次有助于除去疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外，乙腈，丙酮和三氟醋酸（0.1％）梯度洗脱能除去蛋白质污染。
（6）保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或者甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜

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