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主题：【已应助】求助：PCR条带弥散严重，怎么破？

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发表于：2022/03/31 15:54:15 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近200bp DNA PCR实验一直都是这样，以前挺好的，突然就一直是弥散了，不知道问题出在哪里。请各位老师指点一下。感谢老师们帮忙呀！

推荐答案：123回复于2022/03/31
1，看看模版是否降解，如果降解重新提取，如果没有请看2

2，做实验是可设置阴性对照和阳性对照，可看出是体系的问题，还是pcr条件的问题。

3，若阳性对照有目的条带则说明，引物，体系，条件没有太大问题，可能是模版含有某些抑制因素，镁离子和退火温度等可以进行相应的调整，如何调整可以问度娘。

4，若没有目的条带可重新换药品，为了安全，全部用新的或者别人用的好用的。调整到阳性对照出来为止。再重新回头考虑第3条。
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2022/3/31 15:56:26 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1，看看模版是否降解，如果降解重新提取，如果没有请看2

2，做实验是可设置阴性对照和阳性对照，可看出是体系的问题，还是pcr条件的问题。

3，若阳性对照有目的条带则说明，引物，体系，条件没有太大问题，可能是模版含有某些抑制因素，镁离子和退火温度等可以进行相应的调整，如何调整可以问度娘。

4，若没有目的条带可重新换药品，为了安全，全部用新的或者别人用的好用的。调整到阳性对照出来为止。再重新回头考虑第3条。
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mingxiaoyan
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2022/3/31 16:16:37 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能原因：
酶用量过多
模板纯度较低
dNTP、镁离子浓度过高
循环次数过多
解决方法：
减少用酶量或使用特异性高的热启动酶扩增
纯化模板
减少dNTP用量，摸索镁离子浓度
减少循环次数
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