主题：【资料】亲和层析纯化蛋白原理解析

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发表于：2023/09/14 15:25:06 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

蛋白纯化介质主要应用于研究目的蛋白的结构、功用以及相互作用的和过程中。比如：在蛋白纯化过程中，由于亲和层析法的选择性和结合力较强，分辨率也高。所以，亲和层析法是一种常用的蛋白、抗体纯化方法，天地人和生物多种简单易用的亲和纯化介质，适用于批量或利用重力进行纯化，可以高效、便捷、可靠地从品中分离蛋白和抗体，为下游应用提供有力保证。

亲和层析法的原理：

亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶-底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体-抗原，激素-受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素-多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸-互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。

亲和层析的操作步骤:

在亲和层析中，蛋白在影响蛋白(或标签)与其配体之间结合的条件下被加载到柱子上。在不破坏特定相互作用但能破坏污染蛋白与固定相之间任何非特异性相互作用的条件下洗涤结合的蛋白。然后用含有竞争性分子的缓冲液或破坏所有蛋白/蛋白相互作用的条件洗脱结合的蛋白。竞争分子与配体结合，取代目标蛋白，这种竞争分子通常通过另一种色谱流程或透析法从目标蛋白中去除。

亲和层析配体和洗脱条件
需纯化的蛋白	配体	洗脱条件
抗体（抗原特异性）	抗原肽	游离肽
多聚组氨酸标签蛋白	Ni2+或Co2+	咪唑或游离组氨酸
FLAG标签蛋白	FLAG特异性抗体	FLAG肽或低pH值
GST标签蛋白	还原型谷胱甘肽	游离谷胱甘肽
Myc标签蛋白	Myc特异性抗体	低pH
抗体（类特异性）	蛋白A、G和L或精蛋白	pH极端值
DNA结合蛋白	肝素	高离子强度