2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备 精密称取本品25g,置100mL容量瓶中,用蒸馏水定容,使其充分溶解,抽滤。滤液浓缩到50mL,精密吸取20mL,用石油醚(25,25,25,25mL)萃取4次,弃去醚液,水层再用水饱和正丁醇萃取4次(30,30,20,20 mL),合并4次萃取液用氨水振摇萃取2次,每次5 mL,弃去氨液,水浴挥去正丁醇,残渣加水10mL溶解,放冷,通过D101型大孔树脂(内径1.5cm,长12cm),以水70mL洗脱,弃去水液,再用30%乙醇30 mL洗脱,弃去乙醇洗脱液,用70%的乙醇50 mL洗脱,收集洗脱液水浴蒸干,残渣加甲醇溶解,并转移到2 mL量瓶中定容至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成1g/L的溶液,作为对照品溶液。
2.3 薄层条件和扫描条件硅胶G薄层板,110℃活化1 h;以氯仿-甲醇-水(13:6:2)的混合溶剂(在10℃以下放置过夜)下层为展开剂;显色剂为10%的硫酸乙醇;显色后在105℃烘6 min,立即用同样大小的玻璃覆盖,周围用胶布密封固定备用。双波长反射锯齿形扫描;扫描波长λs=530nm,λR= 700nm,狭缝0.4mmx 0.4mm,SX=3。灵敏度中。
2.4 线性关系考察 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液1,2,3,4,5μL点于同一硅胶G薄层板上,晾干,显色,按上述条件扫描测定。以点样量(X)为横坐标,斑点峰面积积分值(Y)为纵坐标,结果表明黄芪甲苷在1.00~5.00μg线性关系良好,计算得回归方程Y=3876.59X+779.49,r=0.9926。
2.5 精密度实验 精密吸取黄芪甲苷对照品2μL,点样,展开,对黄芪甲苷同一斑点重复扫描5次,测定其峰面积积分值,得平均值为8735.309,RSD为2.3%(n=5)表明仪器精密度较好;在同一板上点5个相同量的对照品溶液,测其峰面积并求平均值为11074.05,RSD为3.7%(n=5)。表明同板精密度较好。
2.6 稳定性实验 精密吸取黄芪甲苷对照品1μL,点于薄层板上,展开,显色,每隔30 min测定1次斑点的峰面积积分值,共测定5次,结果表明黄芪甲苷显色后在2.5h内稳定,RSD=2.7%。
2.7 重复性实验 取同一批供试品6份(批号为20020410),分别进行测定,含量的RSD:4.2%,表明本法有良好的重复性。
2.8 样品的测定精密吸取供试品溶液6μL,对照液2,3μL点于薄层板上依法展开,显色,扫描测定,用外标法计算3批样品中黄芪甲苷的含量及RSD。2.9 加样回收率实验 精密取已知含量的样品适量,加一定量的黄芪甲苷对照品溶液,制备供试品溶液,点样展开,显色,按上述测定方法测定。