主题：【原创】【第三届原创大赛】TLC比较中药药对金银花单煎与金银花、连翘共煎后化学成分的变化

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zhou1988

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发表于：2010/11/30 10:07:15 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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[摘要] 目的：通过TLC初步比较金银花单煎与金银花与连翘共煎后化学成分是否有变化。方法：分别制备金银花单煎液与金银花、连翘共煎液不同极性萃取液，采用硅胶薄层层析进行定性比较研究。结果：金银花单煎与金银花、连翘共煎在乙酸乙酯：乙酸（6：1）展开体系中，分别出现5个、4个斑点，两者具有一个共同斑点（Rf=0.87），金银花单煎液中的四个成分均没有出现在药对共煎液中。金银花单煎液中具有最大Rf值（0.88）的斑点,而药对共煎液具有最小Rf值（0.38）的斑点。结论：金银花单煎与金银花、连翘共煎液TLC斑点差别大。

[ Abstract ] Objective: To compare the chemical compositions between

honey suckle decoction and honey suckle & weeping forsythia decoction by TLC. Method: Prepared the honey suckle decoction , honey suckle & weeping forsythia decoction , and two decoctions’ different polar organic solvents extractions, identified all of them by TLC.

Results: The results showed there were 5 dots of honey suckle decoction,4 dots of honey suckle & weeping forsythia decoction respectively, when EtOAc:HAc(6:1) as mobile phase. Just one common dot (Rf=0.87) existed in two decoctions, Conclusion: There exists a big difference between two decoction.

[关键词] 金银花；连翘；薄层层析；化学成分

中药药对是临床极为常用的两药合用。它不仅具有一定的理论依据和有一定的组合法度，而且具有较高的应用价值。在单味中药的现代药理研究取得较大进展的前提下，进一步开展中药复方的现代研究工作，对于理解中药复方治病原理，加速中医药现代化具有极其重要的现实意义。由于单味中药的有效成分本来就比较复杂，因而影响中药复方药理作用的可变因素或因子更加复杂。能否采用引入药对原理，把由多味中药组成的复方解析成数个药对，进行逐对逐层分析研究。

中药药对在煎煮过程中，会产生一些化学变化，我们拟对药对煎煮前后化学成分变化进行初步研究。TLC操作简便，可以采用不同展开系统，选用通用或专用显色剂显色，获得很多信息。通过TLC定性检测药对煎煮前后化学成分，为今后药对的进一步研究提供初始依据。

本实验选用中药中常用的药对：金银花与连翘。金银花为常用中药，是忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb. 红腺忍冬L. hypoglauca Mig. 山金银花L. confusa DC. 或毛花柱忍冬L. dasystyla Rehd. 的干燥花蕾或带初开的花。连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl 的干燥果实。两者具有清热解毒，凉散风热之功效。该药对多用于外感风热及温病，热毒血痢，各种痈痘、肿毒等症。

1. 材料，仪器，试剂

1.1材料

金银花、连翘购自芝林大药房。经鉴定金金银花为忍冬科植物忍冬

Lonicera japonica Thunb. 干燥花蕾或带初开的花。连翘为木犀科植物连翘

Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl 的干燥果实。

1.2 仪器与试剂

层析缸

石油醚，乙酸乙酯、正丁醇、乙酸、乙醇等试剂均为分析纯

自制薄层板用硅胶G及硅胶GF254板: 吸附剂与0．5%CMC—Na溶液按比1g:3ml铺板，规格：7.5 cm×2.5 cm及 15cm×5cm，105℃活化1 h，真空干燥器中备用。

2. 方法与结果

2.1 金银花试液的制备

2.1.1 称取干燥金银花药材10g，加水300ml，煎煮30min，过滤；滤渣中加水150ml，煎煮15min，过滤；合并滤液，得灰白色母液约200ml，命名为1号，备用；

2.1.2 取5号滤液150ml，用石油醚萃取三次，共60ml，得浅黄绿色萃取液，浓缩至20 ml，命名为2号，备用；

2.1.3 6号滤液用乙酸乙酯萃取三次，共60ml,得淡褐色萃取液，浓缩至20 ml，命名为3号，备用；

2.1.4 7号滤液用正丁醇萃取三次，共60ml,得淡黄色萃取液，浓缩至20 ml，命名为4号，备用。

2.2 混合药材试液的制备

2.2.1 称取干燥金银花，连翘药材各10g，加水300ml，煎煮30min，过滤；滤渣中加水150ml，煎煮15min，过滤；合并滤液，得浅褐色母液约200ml，命名为5号，备用；

2.2.2 取1号滤液150ml，用石油醚萃取三次，共60ml，得浅黄绿色萃取液，浓缩至20 ml，命名为6号，备用；

2.2.3 2号滤液用乙酸乙酯萃取三次，共60ml，得淡黄色萃取液，浓缩至20 ml，命名为7号，备用；

2.2.4 3号滤液用正丁醇萃取三次，共60ml，得浅黄色萃取液，浓缩至20 ml，命名为8号，备用。

2.4 TLC实验结果

2.4.1 展开条件

展开剂 A乙酸乙酯：乙酸（4：1）

B乙酸乙酯：乙酸（6：1）

显色剂碘

TLC结果分别见表1、表2

3．讨论

由于水煎液所含物质较多，直接展开将影响斑点的观察，故选择石油醚、乙酸乙酯、正丁醇为萃取剂，按极性由小到大依次萃取不同极性成分，以利于展开后斑点观察，同时也便于体现金银花单煎液与金银花、连翘共煎液的差异集中于何种极性部位。

在实验中展开剂的选择和优化是本实验的重点，为此我们参考文献尝试了许多不同的展开剂，有石油醚与甲醇不同比例的展开剂，氯仿与丙酮、乙酸不同比例的展开剂，乙酸乙酯与乙酸、环己烷不同比例、乙酸乙酯与甲醇、乙酸的不同比例的展开剂，以上这些展开剂的TLC结果中斑点分离度不佳，拖尾现象严重。选用乙酸乙酯：乙酸（4：1）和（6：1）的展开剂，能比较好的克服以上不足。这可能与乙酸乙酯极性适中有关。从化学成分上看，金银花其有效成分主为绿原酸，同时还含有挥发油，黄酮类。连翘主要含苯乙醇苷类、木脂体及其苷类、五环三萜类、酚酸类、挥发油类。金银花与连翘中均含有酚酸类物质，且不含碱性类物质或含量极少，乙酸的引入又可以有效克服拖尾现象。

实验中首先用极性相对较大的展开剂A（乙酸乙酯：乙酸 4：1）展开，从表1中可知，金银花单煎液与金银花、连翘共煎液分别出现3个、4个斑点，两者共同具有一个最大Rf值斑点（Rf=0.96），金银花单煎液中的其余两个成分均没有出现在药对共煎液中，药对共煎液具有两个最小Rf值（0.64、0.71）的斑点。随后用极性现对较小的展开剂B（乙酸乙酯：乙酸 6:1）展开，从表2中可知,金银花单煎液与金银花、连翘共煎液在乙酸乙酯：乙酸（6：1）展开体系中，分别出现5个、4个斑点，两者具有一个共同斑点（Rf=0.87），金银花单煎液中的四个成分均没有出现在药对共煎液中。金银花单煎液中具有最大Rf值（0.88）的斑点,而药对共煎液具有最小Rf值（0.38）的斑点。两者结果表明，展开剂B更能反应金银花单煎、金银花与连翘共煎的TLC差异性。

导致金银花单煎、金银花与连翘共煎化学成分的差异的主要原因①金银花单煎时有成分没有煎出。②金银花于连翘共煎时，成分会产生一些化学反应，如沉淀反应。③共煎液中的成分是连翘具有的，金银花本身没有，这就需要参考连翘单煎的结果。

金银花有几种不同的来源，本实验限于时间等条件，无法一一研究。同时TLC的显色剂也值得进一步研究，如选择其他通用和专属显示剂。本实验只是对药对的煎煮的TLC研究做了初步探讨。

参考文献：

1. 张英华，陈新，张国飞等.芪冬颐心El服液中绿原酸的含量测定[J]．长春中医学院学报，1998，14(3)：52

2. 黄喜茹，刘伟娜，曹冬.金金银花的化学成分药理作用研究评析.中医药学刊.2005年3期

3. 宣小龙，史远刚.中药连翘酯苷成分的提取和薄层层析检测.安徽农业科学2006年6期

4. 贾宪生吴洪飞.薄层扫描法测定金银花中黄褐毛忍冬皂苷甲的含量. 药物分析杂志-2005年6期

附件：

TLC比较中药药对金银花单煎与金银花、连翘共煎后化学成分的变化.doc

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