主题：【第六届原创】银杏酮酯中萜类内酯的含量测定方法学试验（新手上路）

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发表于：2011/12/05 22:02:06 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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银杏酮酯中萜类内酯的含量测定方法学试验（新手上路）

根据相关文献资料，银杏酮酯中的萜类内酯含量测定方法主要有薄层扫描法、高效液相色谱法、差示检测法、ELSD法等。萜类内酯在紫外吸收较弱，极少量的黄酮杂质能严重干扰测定，紫外检测器检测较为困难，示差检测器灵敏度、稳定性和选择性相对较差。参照中国药典2005年版一部及目前大多数国家标准中多采用ELSD法测定萜类内酯的含量。方法学研究内容如下：

1.主要仪器与试药

SPD-10AP输液泵（日本岛津公司）；

ELSD2000蒸发光散射检测器（美国奥泰Alltech）；

SK3300H型超声清洗器（上海科导KUDOS）；

乙腈（色谱纯）；

四腈呋喃（色谱纯）；

水（重蒸水）；其它试剂均为分析纯。

银杏内酯A对照品、银杏内酯B、银杏内酯C及白果内酯（中国药品生物制品检定所提供）。

2.对照品溶液的制备

取在五氧化二磷干燥减压干燥器中放置过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C对照品分别约为5.0mg、5.0mg、3.0mg和2.0mg，精密称定，置同一10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C分别为0.5mg/ml、0.5mg/ml、0.3mg/ml和0.2mg/ml）。

3.试验条件的选择

(1) 仪器条件

流速：1.0ml.min^-1，柱温：35℃，漂移管温度：115℃，氮气流速：3.0L/min。

(2) 流动相的选择

先后比较了正丙醇-四氢呋喃-水（1：15：84）、乙腈-四氢呋喃-水（1：1：6）、乙腈-四氢呋喃-水（11：11：78）。结果以乙腈-四氢呋喃-水（11：11：78）为流动相最佳。

综合上述实验结果，最终确定色谱条件如下：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(150×4.6mm，5μm，岛津)；流动相：乙腈-四氢呋喃-水（11：11：78）；理论塔板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯峰与银杏内酯C峰的分离度应大于1.5。

4.系统适用性试验

取上述对照品溶液注入液相色谱仪，结果见图谱：

5.方法学考察

（1）标准曲线与线性范围的考察

分别精密称取在五氧化二磷减压干燥器中放置过夜的白果内酯对照品8.13mg、银杏内酯A对照品8.815mg、银杏内酯B对照品14.32mg、银杏内酯C对照品7.075mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,即得。分别精密吸取上液2μl、3μl、6μl、9μl和12μl注入色谱仪，记录色谱图，结果见表1、2、3及4：

表1 白果内酯线性关系测定结果

进样量m(µg)	1.626	2.430	4.878	7.317	9.756
峰面积A	388252	698112	1847475	3210344	4580490
lgm	0.2111	0.3872	0.6882	0.8643	0.9893
lgA	5.5891	5.8439	6.2666	6.5066	6.6609

以白果内酯面积对数（lgA）与进样量m(µg)对数（lgm）作一次线性回归，
得线性方程：lgA = 1.3829lgm+5.3048 r = 0.9997。

结论：由线性方程可见，白果内酯在1.626µg～9.756µg范围内进样量的对数与峰面积的对数呈良好线性关系。

表2 银杏内酯A线性关系测定结果

进样量m(µg)	1.763	2.6445	5.289	7.9335	10.578
峰面积(A)	193865	301558	700736	1198264	1662906
lgm	0.2463	0.4223	0.7234	0.8995	1.0244
lgA	5.2875	5.4794	5.8456	6.0786	6.2209

以银杏内酯峰面积对数（lgA）与进样量m(µg)对数（lgm）作一次线性回归，
得线性方程： lgA = 1.2127lgm+4.9781 r = 0.9996。

结论：由线性方程可见，银杏内酯A在1.763µg～10.578µg范围内进样量的对数与峰面积的对数呈良好线性关系。

表3 银杏内酯B线性关系测定结果

进样量m(µg)	2.864	5.728	8.592	12.888	17.184
峰面积(A)	152064	240326	508022	801281	1149575
lgm	0.457	0.6331	0.9341	1.1102	1.2351
lgA	5.182	5.3808	5.7059	5.9038	6.0605

以银杏内酯B峰面积的对数（lgA）与进样量m(µg)对数（lgm）作一次线性回归，
得线性方程： lgA = 1.1181lgm+4.6694 r = 0.9998。

结论：由线性方程可见，银杏内酯B在2.864µg～17.184µg范围内进样量的对数与峰面积的对数呈良好线性关系。

表4 银杏内酯C线性关系测定结果

进样量m(µg)	1.415	2.1225	4.245	6.3675	8.49
峰面积(A)	132185	219793	506233	916531	1308247
lgm	0.1508	0.3268	0.6279	0.804	0.9289
lgA	5.1212	5.342	5.7044	5.9621	6.1167

以银杏内酯C面积的对数（lgA）与进样量m(µg)对数（lgm）作一次线性回归，
得线性方程：lgA =1.2809lgm +4.9221 r = 0.9995。

结论：由线性方程可见，银杏内酯C在1.415µg～8.49µg范围内进样量的对数与峰面积的对数呈良好线性关系。

（2）精密度试验

精密吸取供试品溶液10μl，连续进样5次，记录色谱图，读取峰面积，考察本法的精密度。结果见表5：

表5 精密度试验结果（n=5）

No　峰面积(A).	1	2	3	4	5		RSD%
银杏内酯C	336614	338273	341352	338769	341956	339392.8	0.66
白果内酯	1639609	1650025	1660489	1655840	1651997	1651592	0.47
银杏内酯A	1513109	1515628	1527803	1546272	1515366	1523635.6	0.91
银杏内酯B	412862	416221	417709	415927	418098	416163.4	0.50

结论：由上表数据可见，本法精密度较好。

（3）稳定性试验

精密吸取供试品溶液10μl，分别于0、1、2、4、8、12小时进样测定5次，记录色谱图，读取峰面积，考察本品的稳定性。结果见表6。

表6 稳定性试验结果表（n=5）

时间(h) 峰面积(A).	0	3	6	9	12		RSD%
银杏内酯C	426331	421033	428603	427911	426188	426013	0.69
白果内酯	1680467	1670942	1639215	1684216	1672518	1669472	1.07
银杏内酯A	1441939	1437859	1458886	1457883	1454328	1450179	0.67
银杏内酯B	443658	445423	441548	442034	444323	443397	0.36