主题：【原创】肉制品中人工合成色素的检测

浏览0 回复21 电梯直达

会师楼

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2014/06/20 15:06:30 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被luxw设置为精华；

熟肉制品中5 种人工合成色素的检测

食品着色剂可分为天然色素和人工合成色素两大类，因人工合成色素具有成本低廉、色调多样、色泽亮艳和着色力强等特点，在食品加工业中被广泛采用。因其是由煤焦油中的苯胺为原料制成，所以又称为“煤焦油色素”或“苯胺色素”，属于偶氮类化合物。毒理学研究发现，某些合成色素有慢性毒性或致癌性，使用过量会对人体产生有害作用。在我国人工合成色素使用卫生标准中对其使用范围和相应限量均有明确规定，使用范围限于饮料、配制酒、糖果、糕点和青梅等，禁止用于肉类、鱼类、水果及其制品等。本实验采用高效液相色谱法对熟食肉制品中5 种人工合成色素进行分离检测，得到了满意的结果。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

各种熟肉制品60 件为在本市范围内抽取。1 . 0 0mg /mL 柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红标准溶液中国计量科学研究院；混合标准储备液：分别准确吸取1mL 各标准溶液于10mL 容量瓶中，用水定容至刻度，得100μg/mL 混合标准使用液(4℃保存2 个月)；乙醇氨水溶液；乙醇- 氨- 水(7:2:1，V/V)；酸化甲醇：甲醇- 甲酸(6:4，V/V)；甲醇(色谱纯) 美国Tedia 公司；所用试剂除特别标注外均为分析纯；水均为超纯水。600E 型高效液相色谱仪、2996 型二极管阵列检测器美国Waters 公司；KH-600E 超声波清洗器昆山禾创超声仪器有限公司；PT-310 电子天平德国赛多利斯公司；AFX2-1001-P 超纯水机颐洋企业发展有限公司；KDC-1042低速台式离心机科大创新股份有限公司中佳分公司；Anke TGL-16B 高速离心机上海安亭科学仪器厂。

1.2 样品处理

将样品粉碎混合均匀，称取10g 左右(精确至0.01g)置入100mL 烧杯中，加海沙少许(约10g)，混合均匀，再加入30mL 石油醚，搅拌，超声10min，放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理3 次，以除去脂肪，用80℃水浴挥尽石油醚后，残渣转移至50mL 离心管中，加入乙醇氨水溶液25mL，超声振荡10min，提取色素，3000r/min 离心10min，上清液倒入100mL 烧杯(不要用滤纸过滤) ，残渣继续用乙醇氨水溶液提取，至提取液无明显颜色。合并上清液于100mL 烧杯中，用80℃水浴挥至10mL 左右(不得挥干)，用20% 柠檬酸溶液调pH 值至酸性，待用。

1.3 样品净化

将1.2 节处理后所得的溶液保持在60～80℃，加入预先用水活化过的自制聚酰胺SPE 小柱。用70℃、pH4的柠檬酸溶液淋洗，每次2 0mL，边洗边搅拌，重复3～4 次。再用酸化甲酸溶液淋洗至中性，然后用乙醇氨水溶液洗脱，收集全部洗脱液于100mL 烧杯中，用80℃水浴挥至2mL左右(不得挥干)，用水稀释至10mL比色管中定容至10mL 刻度。12000r/min 离心10min，上清液经0.45μm 滤膜过滤，得样品制备液，供高效液相色谱分析用。

1.4 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C18(4.6 × 250mm，5μm)；part number 00201-31043;serial number 211302350;

流动相及梯度：A 相为0.02mol/L 乙酸铵溶液，B 相为甲醇，0～2min，95% A → 65% A；2～7min，65% A → 0% A；7～10min，0% A → 95% A；10.1～21min，95% A → 95% A；流速：1.0mL/min；柱温：3 5 ℃，进样量：1 0μL。检测器：二级管阵列检测器(PDA)；波长范围：210～60nm。

1.5 标准曲线

将混合标准储备液分别稀释至每毫升相当于1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μg 混合标准系列(现用现配)。将混合标准系列溶液，在上述色谱条件下进行测定，以标准系列溶液浓度为横坐标(X)、相应的峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归。

1.6 人工合成色素含量计算

混合标准系列溶液与样品制备液按照1.4 节色谱条件进行检测，5 种人工合成色素与熟肉制品中其他共存物质分离良好，测定不受干扰。计算试样中人工合成色素的含量。

A × V × 1000

X=————————

m× 1000 × 1000

式中：X 为样品中人工合成色素含量/(g/kg)；A 为样品测定的含量/(μg/mL)；V 为样品定容体积/mL；m为样品质量/ g 。

2 结果与分析

2.1 色谱图及最大吸收波长

高效液相色谱与二极管阵列检测器联用，可绘制出随时间(t)的变化经过检测器样液的光谱吸收曲线-吸光度(A)随波长(K)变化的曲线，因而可由获得的信息绘制出具有三维空间的色谱图，用二极管阵列检测器采集5 种人工合成色素在210～600nm 波长范围内的光谱图，得到5 种人工合成色素的最大吸收波长为柠檬黄420nm、苋菜红520nm、胭脂红510nm、日落黄487nm、诱惑红509nm。在1.4 节色谱条件下5 种人工合成色素保留时间重现性良好，样品经净化后无明显干扰，其标准溶液、加标样品和空白样品在210～600nm波长范围内的最大值色谱图如图l 所示。

2.2 标准曲线方程的确定

将混合标准系列溶液在1 . 4 节色谱条件下进样分析，以混合标准系列溶液质量浓度为横坐标(X)、其相应的峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得以下5 种人工合成色素的回归方程、线性范围及相关系数，方法的最低检测限按3 倍信噪比计算(表1)。

2.3 精密度及加标回收率实验

分别称取10.00g 同一混合均匀的样品共8 份，其中两份本底，6 份分别准确加入500μL 100μg/mL 混合标准溶液做加标回收，按照1.2 节方法操作，分别定容至10mL 比色管，制备液相当于加标质量浓度为5μg/mL，测定空白、加标样品中5 种人工合成色素的质量浓度。样品本底为未检出，计算加标平均回收率，每组加标样品测6 次，结果见表2 。

以上验证实验结果RSD 值均小于5%，说明精密度良好，平均回收率也较高。所以，证明该处理方法所测得的结果准确可靠，重现性良好。2.4 熟肉制品中5 种人工合成色素的检测按照1.2 节方法测定60 件熟肉制品，其中2 件卤鸡爪样品中含有柠檬黄，结果为0 .0 63 、0 .0 52 g/kg 。1件卤鸡爪样品中含有柠檬黄和日落黄，结果为0.047、0.016g/kg。1 件熟制牛肉样品中含有苋菜红和诱惑红，结果为0.023、0.011g/kg。1 件卤猪肉样品中含有胭脂红0.008g/kg。检出率为8.33%。