UPLC:即超高效
液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC),是在传统的HPLC系统的基础上开发的。
我们看一下UPLC的定义:基于亚二微米填料颗粒技术的
液相色谱分离技术。
那么为什么关注小颗粒色谱填料?
1、 小颗粒填料柱效更高。
改善分离度/提高灵敏度
根据
液相色谱分离的解析度方程,解析度正比于柱效能的平方根,而根据范迪姆特(Van Deemter)色谱理论,柱效反比于系统固定相粒度大小。UPLC系统运用的固定相粒度能达到1.7μm,根据上述方程,该系统达到的效能将比5μm粒度系统高70%,而比3.5μm高40%。
2、 小颗粒填料的柱效随流速升高变化小
加快分离速度
这样我们在分离的过程中就可以采用短色谱柱、采用小粒径色谱填料、高流速运行
因此UPLC的技术优势就体现出来了:提高分析速度、节省化学试剂、提高工作通量、提高分离度、提高实验室效率。
那我们使用中应该注意哪些问题呢?
1、在高流速下用高效短柱进行快速
液相色谱分离,保持分离度
2、在常规流速下使用较长色谱柱进行高分离度色谱分离,可适当提高流速加快分离
在流速和分离度之间会有取舍,但常常可以实现更快和分离度更高的结果。
但是上述优点的代价是:更高系统压力,因此不能简单的将UPLC色谱柱使用到HPLC系统中,必须使用相匹配的耐高压系统。