?qPCR(定量聚合酶链反应)的定量原理基于PCR扩增反应过程中荧光信号的变化,通过对PCR扩增反应每一个循环产物荧光信号的实时检测,从而实现对起始模板的定量分析。?
qPCR技术通过在PCR过程中加入荧光基团,根据荧光信号的变化实时监测扩增产物的增加。在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值(每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数)与该模板的起始拷贝数存在线性关系。因此,可以通过Ct值进行定量分析。Ct值越小,表示反应扩增到达平台期所需的循环数越少,即目的基因起始含量越高。
qPCR的荧光标记方法主要包括SYBR Green I染料法、Taqman探针法、淬灭染料引物法等。这些方法通过不同的方式实现对PCR产物的荧光标记和检测,从而精确地定量分析起始模板的拷贝数。