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主题：【第十届原创】第十届原创大赛有奖征文——脂溶性异构体样品制备分离

浏览0 回复5 电梯直达
yongzhbenq
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发表于：2017/08/30 11:28:42 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明：本文为yongzhbenq原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
一、前言
随着键合技术的发展，越来越多的填料适合于结构异构体的分离。
针对极性化合物的异构体分离，我们可以选择含卤素的键合相，比如常见的PFP或者F-C8
针对非极性化合物的异构体分离，我们可以选择多层键合的键合相，比如常见的PAH或者C30。
本文以我们实验室制备分离纯化的一个样品为例，简单探讨一下制备分离纯化的过程，欢迎小伙伴们一起探讨学习，共同提高。

二、填料筛选
客户样品是脂溶性油状物，并且存在着难以分离的结构异构体，我们选择三款键合相不同的色谱柱Welch Ultimate XB-C18（单层键合），Welch UltimatePAH（多层键合），Welch Ultimate XB-C30（多层键合）对目标物质进行分离。使用客户的分析条件（表1），进样20uL。
表1  填料筛选条件
色谱柱Welch UltimateRXB-C18，10um，4.6*250mm；
Welch UltimateRPAH，10um，4.6*250mm；
Welch UltimateRXB-C30，10um，4.6*250mm
流动相甲醇：乙腈=70:30
流速1mL/min
检测波长254nm
样品称量样品1.0mg，使用流动相1mL溶解样品，过滤。
上样体积20uL

由于考虑到后期规模化制备，因此填料筛选时使用10um粒径的填料进行。谱图如下：
a、XB-C18谱图
b、PAH谱图
c、XB-C30谱图

从上面的谱图明显看出，Welch Ultimate XB-C18，Welch Ultimate PAH对分离的影响不大，但是Welch Ultimate XB-C30较其他两种填料多分出一个峰，表明Welch Ultimate XB-C30更适合于这个混合物的分离。因此，固定制备条件（表2）。

表2 制备条件

色谱柱Welch UltimateRXB-C30，10um，4.6*250mm
流动相甲醇：乙腈=70:30
流速1mL/min
检测波长254nm
上样体积20uL


同时，在后续的纯度检测中，使用我们也同样使用Welch Ultimate XB-C30，5um，4.6*250mm取代Welch Ultimate XB-C18，5um，4.6*250mm对样品的纯度检测分析。

表3 分析条件

色谱柱Welch UltimateRXB-C30，5um，4.6*250mm
流动相甲醇：乙腈=70:30
流速1mL/min
检测波长254nm
上样体积20uL


四、使用制备柱对样品进行制备分离
使用丙酮溶解样品，浓度为30mg/mL，使用Welch Ultimate XB-C30，10um，30*250mm ，根据上样量与色谱柱的内径平方成正比计算得到30mm内径的制备柱上样量大约在4ml，流速40ml/min。经过微调，将流速降低到30ml/min。谱图如下：

分段收集：49-59min，59-69min，69-96min，96-100min，100-104min。分别标记为b1、b2、b3、b4、b5。



对收集后的样品进行分析测试

分段收集后，使用分析条件对收集的样品进行纯度分析。

b1号样品 目标峰纯度：97.6%

b2号样品 目标峰纯度：98.5%

b3号样品 目标峰纯度：98%

b4号样品 目标峰纯度：94.2%

b5号样品 目标峰纯度：87%



五、结论

使用丙酮溶解样品，浓度为30mg/mL，一次上样4mL，具体条件如下：

色谱柱Welch UltimateRXB-C30，10um，30*250mm
流动相甲醇：乙腈=70:30
流速30mL/min
检测波长254nm
上样量120mg

纯度及回收率如下表，符合客户要求：

样品纯度

回收率

大于等于98%

89.88%

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我是风儿
nphfm2009
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2017/8/30 20:29:40 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问第四部分分段时间收集b1、b2、b3、b4、b5的原理是什么？为什么可以根据这样的时间段进行收集不同的物质？
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zyl3367898
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2017/9/4 20:43:04 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
前面出平头峰，后面出大趴峰，这峰出的不对。
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yongzhbenq
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2017/9/7 17:10:53 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 我是风儿(nphfm2009) 发表:
请问第四部分分段时间收集b1、b2、b3、b4、b5的原理是什么？为什么可以根据这样的时间段进行收集不同的物质？


这个文章，中间省却了小柱逐级放大的过程，在放大过程中，我们一开始是每隔相同时间点进行收集，并检测纯度。
因此在后期制备的时候，针对峰从顶点下落的时候这一段，也就是b4，纯度虽然不符合要求，但是需要收集进行二次纯化。
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yongzhbenq
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2017/9/7 17:13:09 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:
前面出平头峰，后面出大趴峰，这峰出的不对。


不清楚这位老师说的是什么意思？
是不是是针对第一张对比的谱图？那个谱图是显示放大，工作站看见的效果图，不是制备的谱图。
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氢锂钠钾铷铯钫
YJYQXCYS
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2017/11/26 22:50:18 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这篇文章很有借鉴意义。
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