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主题：【极限体验活动&原创大赛】利用极限色谱柱分析复方注射液

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〓猪哥哥〓

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发表于：2009/10/27 23:51:24 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被yongzhbenq设置为精华；

在此首先感谢welch公司提供的极限色谱柱（试用）。
下面是我接到的极限色谱柱的一些信息：
柱子：Ultimate XB-C18，5um，4.6*200mm
测试仪器：安捷伦1200
一、最初100%甲醇冲洗色谱柱
100%甲醇：压力=63bar，相比安捷伦柱子，柱压稍偏高（250mm的柱子，安捷伦柱压可以达到55-56bar左右）。不过最后在清洗色谱柱之后，压力达到了57bar，可能试用柱使用前有物质残留。
二、根据测试报告使用75%甲醇-25%水进行测试
根据极限色谱柱的测试报告设定色谱条件。同时根据色谱柱的使用说明，控制流动相的PH在2-10之间。
测试色谱条件：
流动相：（75%-25%）甲醇-水
流速：1ml/min
柱温：23℃
检测波长：254nm
进样量：1ul
样品的制备：取苯和甲苯各50ul，用甲醇稀释至10ml，0.45um滤过后进样。由于实验室没有采购苯酚，尿嘧啶和4-氯硝基苯，所有只用了苯和甲苯进行测试。
不过在冲洗色谱柱的时候发现，有一个较大峰出现，可能试用柱在邮寄前已经被试用，且有物质残留。截图如下：

使用过程中压力相当的稳定（压力为136bar），压力曲线为：

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2009/10/27 23:56:47 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1）与测试报告比较结果
色谱柱原测试报告

苯（保留时间t=4.645），甲苯（保留时间t=6.23）：

与标准测试报告相比较：
因测试报告列出的是甲苯的参数，故与试验甲苯进行比对：

2）标准曲线
通过进样不同体积的样品：1ul，3ul，5ul，7ul，10ul

1ul

3ul

5ul

7ul

10ul

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2009/10/28 0:01:02 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

苯的标准曲线图

甲苯的标准曲线图

精密度试验：（只平行进样了三针）

结果：甲苯峰面积RSD%为：0.503322<3
苯峰面积RSD%为：0.604163<3

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2009/10/28 0:01:50 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

复方样品稍后补充完毕

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2009/10/28 8:54:11 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

不错，做的很仔细，虽然是简单的样品分析，但是看得出楼主做的很精细，期待复方注射液的谱图分析

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zxhcnf

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2009/10/28 10:28:36 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主您好，在您的帖子上有两个问题我想解释一下

1."不过在冲洗色谱柱的时候发现，有一个较大峰出现，可能试用柱在邮寄前已经被试用，且有物质残留。"

这种情况是新柱子在冲洗柱子的时候，通常都会出现的状况，这是正常的，因为1）流动相的组成有差异，我们的甲醇：水＝75：25是预先混合好的，而您那里可能是用四元低压梯度泵混合的，组成会有些微的不同；2）柱子两端在接上去的时候会有一段空气；这两种情况可能是造成这种状况的原因，就算是您用的柱子取下来，第二天再用平衡柱子的时候也会出现这种峰，如果您仔细看一下就会发现，第一个峰总是一启动泵就出来，而第二个峰过了大约3min左右的死体积处出来，应该不是被试用过的样品残留。

2. 您测试的数据中“选择性”一栏的差异
选择性是样品峰和前一个样品峰来比较的，我们是用“甲苯和对氯硝基苯”来比较，您这里是用“甲苯和苯”来比较的，所以数据有些差异；

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2009/10/29 7:47:25 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 yongzhbenq(yongzhbenq) 发表:
不错，做的很仔细，虽然是简单的样品分析，但是看得出楼主做的很精细，期待复方注射液的谱图分析

感谢提供试用色谱柱！

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2009/10/29 7:47:51 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 zxhcnf(zxhcnf) 发表:
楼主您好，在您的帖子上有两个问题我想解释一下

1."不过在冲洗色谱柱的时候发现，有一个较大峰出现，可能试用柱在邮寄前已经被试用，且有物质残留。"

这种情况是新柱子在冲洗柱子的时候，通常都会出现的状况，这是正常的，因为1）流动相的组成有差异，我们的甲醇：水＝75：25是预先混合好的，而您那里可能是用四元低压梯度泵混合的，组成会有些微的不同；2）柱子两端在接上去的时候会有一段空气；这两种情况可能是造成这种状况的原因，就算是您用的柱子取下来，第二天再用平衡柱子的时候也会出现这种峰，如果您仔细看一下就会发现，第一个峰总是一启动泵就出来，而第二个峰过了大约3min左右的死体积处出来，应该不是被试用过的样品残留。

2. 您测试的数据中“选择性”一栏的差异
选择性是样品峰和前一个样品峰来比较的，我们是用“甲苯和对氯硝基苯”来比较，您这里是用“甲苯和苯”来比较的，所以数据有些差异；

感谢月旭的热情回答！

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2009/10/29 7:51:22 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

三、对一化学药的分离情况
采用的流动相为：80%甲醇-20%酸水，压力=123bar。
由于是一类化学新药，结构暂时保密。为一个酯类成分
色谱条件：
流动相：甲醇-酸水=80：20
流速：1ml/min
检测波长：280nm
柱温：25℃

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2009/10/29 7:56:04 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

四、对一复方中药的分离情况
色谱条件：甲醇-酸水梯度洗脱
波长：298nm
流速：1ml/min
柱温：25℃

由于是做指纹图谱，且看和相似度和共有峰的分离度

采用极限色谱柱分离复方注射液的指纹图谱如下（连续进样两针）：

采用安捷伦色谱柱（5um，4.6*250mm）分离的情况：

从以上图谱可以看出：
极限色谱柱200mm分离效果可以达到安捷伦色谱柱250mm的分离效果，对中药的成分分离和含量测定有很大帮助！

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2009/10/29 7:57:48 10楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

总结试验中发现的几个问题：
1、色谱柱接口与安捷伦的螺丝不能很好的密封，由部分漏液。尝试多次，还是有点漏。
2、压力很大，报告上104bar，测试为136bar
3、色谱柱里面有异物，出了很大的未知峰（zxhcnf介绍为是气泡的原因）。
4、压力非常稳，基线亦平稳
5、对中药复杂成分有较好的分离效果，值得采购！

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