主题：【求助】麦冬中多糖，皂苷，黄酮的薄层方法

生 脉 散 细 粒 剂 中 麦 冬 的 鉴 别


周　欣 (南京军区福州总医院药理科　福州　350025)

刘文英　(中国药科大学药物分析教研室　南京　210000)



摘要：采用薄层色谱法对生脉散细粒剂中麦冬进行定性鉴别以此辅助生脉散细粒剂的质量控制，通过两种方法的比较，确定较为满意的鉴别方法。
关键词：生脉散细粒剂；麦冬；薄层色谱；鉴别

    生脉散是益气复脉的著名方剂［1］，由人参、麦冬、五味子组成，其中麦冬为百合科植物麦冬［Ophiopogon japonicus（Thunb．）Ker-Gawl］的干燥块根［2］，产于全国大部分地区，以浙江、四川为主。生脉散曾被制成多种剂型，如注射剂、颗粒剂等。生脉散细粒剂是一种新剂型，为了验证经新工艺处理后的生脉散方中仍保留有麦冬成分，本文通过薄层层析法对该剂型中的麦冬进行定性鉴别，通过两种方法的比较，确定了一种较为满意的鉴别方法。
1．仪器与试药
1．1 仪器 UV-Ⅲ型多功能紫外分析仪(北京凯金电讯设备研究所)
1．2 试药 硅胶G，(中国青岛海洋化工集团公司)，麦冬(杭麦冬)、人参、五味子(北五味子)，生脉散细粒剂中多糖、皂甙、氨基酸粉末(广东敬修堂提供)，试剂均为分析纯；薄层板制备：按中国药典1995年版附录VB制备。
2 实验部分
2．1 方法的比较及确定
2．1．1 方法1
    麦冬对照药材溶液的制备
    称取麦冬粗粉5 g，加热微沸1 h，滤液浓缩近干，用30 ml乙醚提取，分取澄清乙醚层，水浴蒸干，残留物加乙醚使成1 ml，作为麦冬药材对照品溶液（1）［3］。
五味子对照药材溶液的制备
    称五味子粗粉5 g，余下步骤同与溶液（1）的制备，作为五味子对照药材溶液（2）。
生脉散样品溶液的制备
    称取生脉散细粒剂中多糖、皂甙、氨基酸（2．8∶1．3∶1）混合粉末1．5 g，加适量水溶解，用30 ml乙醚提取，分取澄清乙醚层，水浴蒸干，残留物加乙醚使成1 ml，作为生脉散样品溶液（3）。
    鉴别1：吸取3种溶液约10 μl～15 μl，点样于同一硅胶G板，以甲醇∶乙酸乙酯∶甲酸（15∶13∶2）为展开剂，取出，晾干，于紫外灯365 nm下观察。
    结果：溶液（1）出现一个较强蓝色荧光斑点，溶液（2）及溶液（3）在对应位置也出现蓝色荧光斑点，溶液（2）的斑点荧光较弱(见图1)。





图1　薄层层析图


1．麦冬药材对照溶液，2．五味子对照药材溶液，3．生脉散样品溶液

图2　薄层层析图


1．麦冬对照药材溶液，2．麦冬药材阴性对照溶液，3．生脉散样品溶液，4．生脉散皂甙液，5．生脉散缺皂甙阴性对照溶液


    鉴别2：吸取3种溶液约10 μl～15 μl，点样于同一硅胶G板，以甲醇∶乙酸乙酯∶甲酸（15∶13∶2）为展开剂，采用程序多次展开技术（PMD），按同一方向多次展开，每次展至规定距离(本试验展距分别为4 cm，8 cm，12 cm，16 cm)后，取出，晾干，再用同一展开剂同向展开。展毕，取出，晾干，显色方法同上。
    结果：PMD无法除去五味子对麦冬的干扰。
2．1．2 方法2
    麦冬对照药材溶液的制备［4］
    取麦冬粗粉5 g，加水30 ml，煮沸10～15 min，煎煮3次，取3次煎煮液浓缩至约5 ml～8 ml后，用二倍量95％乙醇沉淀蛋白，回收乙醇至干，用1 ml 95％乙醇溶解，作为溶液（1）。
麦冬药材阴性对照溶液的制备
    取人参、五味子各5 g，每次加水60 ml，余下步骤同于麦冬药材对照品的制备，作为溶液（2）。
    生脉散样品溶液的制备
    取生脉散细粒剂多糖2．8 g，皂甙1．3 g，氨基酸1 g，加50 ml水溶解，抽滤，滤液浓缩至约5 ml～8 ml，后用二倍量95％乙醇沉淀蛋白，余下步骤同于麦冬对照药材，作为溶液（3）。
    生脉散皂甙样品溶液
    取生脉散皂甙1．3 g，加水20 ml，操作同于生脉散样品溶液的制备，制得溶液（4）。
    生脉散缺皂甙阴性对照溶液的制备
    取生脉散细粒剂多糖2．8 g，氨基酸1 g，加水40 ml，同法制得溶液（5）。
  鉴别1：吸取上述5种溶液10 μl～15 μl点样于同一硅胶G板，以氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）上层液为展开剂展开，取出，晾干以10％硫酸乙醇为显色剂，于100℃烘至显色［4］。
    结果：溶液（1）只出现一个墨绿色斑点，溶液（3）、（4）在相应位置也只出现同样墨绿色斑点，溶液（2）在该处无斑点。溶液（5）无任何斑点(见图2)。
鉴别2：以环己烷-丙酮（1∶1）为展开剂，其余条件同鉴别1。
结果：溶液（1）只出现一个墨绿色斑点，溶液（3）、（4）出现同样墨绿色斑点，而溶液（2）、（5）无此斑点，但Rf值优于鉴别1(见图3)。





图3　薄层层析图


1．麦冬对照药材溶液，2．麦冬药材阴性对照溶液，3．生脉散样品溶液，4．生脉散皂甙溶液5．生脉散缺皂甙阴性对照液

2．3 讨 论
    上述两种方法比较，方法1由于五味子对麦冬的鉴别有干扰，专属性差，方法2较简便，专属性佳，两种展开系统对比，在专属性，斑点清晰度，重现性方面基本一致，但系统2的Rf值较好，故选择展开系统2。只是存在显色后斑点颜色易褪色的问题。
    作者曾按1995年版药典所载生脉饮方中麦冬的薄层鉴别法对生脉散细粒剂中的麦冬进行鉴别考察，发现生脉散细粒剂多糖、皂甙、氨基酸混合物的样品溶液在麦冬对照品相应位置上有同样墨绿色特征斑点，据报道此斑点为麦冬中一种未知成分酸水解后显色所得［1］。
    由于时间关系及条件限制，无法确定本文中的墨绿色特征斑点为麦冬的哪一种皂甙显色所成，也无法确定本文中的墨绿色特征斑点与1995年版药典所载生脉饮方中麦冬的薄层鉴别法中的墨绿色特征斑点是否为同一种成分，这仍有待进一步探讨。
参考文献
［1］严永清主编：生脉散口服液的综合研究，中国医药科技出版社，北京，1990，6，7，28.
［2］刘训红主编：中药材薄层色谱鉴别，
［3］吴秀清等：生脉颗粒质量标准研究，中药材，1996，19（12）：634～636.
［4］丛月珠：生脉散注射液中麦冬薄层，中成药研究，1980，（2）：41.