主题:【求助】生物样品电镜前处理

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stnj07
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我做生物样品电镜,请问用什么脱水和干燥方式能保证样品原来形态?
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jackyzhao
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原文由 stnj07 发表:
我做生物样品电镜,请问用什么脱水和干燥方式能保证样品原来形态?


可以使用冷冻。
fftao812
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生物样品前处理需要固定好,丙酮逐级脱水,临界点干燥,表面导电处理,这几步都做好了,样品才好。
fftao812
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(一)样品的预处理
扫描电镜生物样品预处理包括:取材、表面清洗、固定、漂洗和脱水。
1.标本在固定之前,应用生理盐水缓冲液或酶消化液清洗它的表面,特别是气管,消化道的粘膜面,要去掉粘液及附着在上面的其他物质。否则会遮盖表面结构,影响观察。
2.所取的样品比透射电镜取材大一些,一般可在8~10mm2左右,固定的时间也应相应加长。气管及消化道的标本应用大头针将两端固定在硬纸片上,以防固定后收缩,影响观察面。
3.样品经固定后,乙醇或丙酮从低浓度逐级脱水后,浸泡在醛酸乙戊酯中间液里。
(二)样品的干燥
样品经过脱水后,脱水剂取代了样品中原来的位置。样品观察又是在高真空状态下进行,脱水剂在高真空状态下汽化易污染样品,破坏超微结构。因此必须将脱水剂在样品不受或少受表面张力影响的条件下去除脱水剂,对样品进行干燥处理。常用的干燥方法有空气自然干燥法、临界点干燥法、冷冻干燥法等。
1.空气自然干燥法  该方法一般只适用于表面较为坚硬的样品。将经脱水的样品,暴露在空气中使脱水剂自然挥发干燥。其优点是简单易行和节省时间,但它的缺点是在干燥的过程中,组织会因脱水剂的挥发时表面张力的作用造成收缩变形。
2.临界点干燥法  它是利用在气液界面的消失,表面张力也消失的情况下来干燥生物材料。因为不存在表面张力,所以也不会引起组织块发生皱缩和变形。较好的保存了样品的超微结构。是目前最常用的一种干燥法。用于临界点干燥的过滤性液体有CO2。临界点干燥是在临界点干燥仪中进行。其条件为以醋酸异戊脂作为脱水剂的置换剂,温度加至40℃,压力最好接近1.0132×107Pa(100个大气压),否则容易失败。
fftao812
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原文由 fftao812 发表:
以上引用自我实验室编写的相关讲义
stnj07
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我主要是看样品表面菌的作用?请问清洗过程中会不会有问题?还有直接冻干行么?
shanbuzhuan
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请问冷冻干燥适用吗?我以前都是用临界点干燥的,比较麻烦
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