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紫外可见分光光度计（UV）

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主题：【讨论】阿尔发葡萄糖苷酶被中草药抑制实验

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tylerconan

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发表于：2009/05/17 16:40:00 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我现在有100多种中草药了，目前测定了40多个，只有2个中草药山茱萸和覆盆子在我的条件下有抑制效果，其它中草药仅从吸光度上看趋势，就不对。应该是中草药的浓度越小，抑制效果越差，也就是吸光度越高。但我想，其它的中草药应该也会有抑制效果吧？如果我再调整一下酶或者底物的浓度或许也可以。但现在时间太紧了，我没有时间一个一个摸条件了，大家说应该怎么办啊？有没有更好的办法能及时有效地解决这个问题？

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2009/5/17 17:30:30 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

看了你写的，有些疑问：

你怎么知道这40多个中草药会有抑制作用？是它们都含有特定成分？

中草药浸出液一般都有颜色的，不同浓度有不同吸光度；你的试验方案中消除了不同中草药/不同浓度本身吸光度不同这个影响吗？看你写的，现在测到的结果是中草药浓度越小，抑制处理后吸光度越低，与设想的相反；这是否就是因为没有扣除中草药本身颜色（吸光度）的影响呢？

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2009/5/17 17:41:42 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢您的回复。中草药本身的颜色消除了，做了对照测了吸光度减去了。
我是想说，实验之前也不知道每个中草药的情况，不知道它能否抑制酶，只能筛选，但现在只发现有2个在我目前的条件（酶的浓度、底物的浓度和体积等条件均已确定）下有抑制作用，其它的怎么办呢？在这样的情况下就说剩下的中草药就没有抑制活性了是不是太草率了。但如果再改变条件去试的话，我想我没有太多的时候去一个一个去测了。如果再改变条件再试的话，工作量就太大了。

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2009/5/17 18:24:56 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果你做过重现性试验，在相同条件下结果能重现，那只能说在你设定的条件下没有明显的抑制作用。
据我了解酶作用的影响因素是很多的，除了你说的浓度外，pH、金属离子等都可能产生明显影响。你还是在校学生吧，不知道你的中草药加进去以后是什么途径起抑制作用的，这可能是你论文中要阐述的。
不知道你是研究生还是本科生，如果是后者，应该这些分量也可以了；如果是前者，我看应该有进一步的深度，如条件试验内容，就是什么条件下抑制效果较好，它的规律怎样，建议对已有效果的1-2种中草药做些补充。

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2009/5/17 18:57:47 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢您的建议。十分感谢。
因为样品中草药太多了，200个，所以目前的工作计划是先筛选出来有抑制酶活性的，然后在此基础上，把有活性的再通过正交设计之类的考察一下各个条件对活性的影响，再做些有关随着时间，活性变化或抑制类型等的实验。也就是您所说的深度吧。但现在就是不知道这样筛选下来，是不是漏掉了一些本来有抑制，但不在我目前的条件下显现出来活性的中草药。目前测了40个，只筛选出来 2个，就更让我怀疑了，有些不敢贸然前进了。
而且，我也想知道，到底是什么原因会出现不符合理论吸光度变化趋势的现象（也就是随着中草药浓度下降，本应的吸光度升高反而是吸光度下降）？是酶过量把底物都分解完了？还是底物量太小？（底物在酶的作用下释放出的物质有黄色）

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2009/5/17 19:22:25 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

中草药组分是不是对黄色产物有吸附作用？或者有消色作用？

你可以将反应后黄色的反应液取出一些，加热灭活后，再加些中药进去看看吸光度是否会降低。当然要选择那些不成功的中药，而且要用反应同样条件处理一下。

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2009/5/17 19:49:02 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

好的，谢谢指导。我明天就试一下。我明白您的意思了。不过，这个实验要求在测定前是要先把酶灭活的（80度水浴后加入碳酸钠溶液就可以灭活），所以在测吸光度时，酶反应是已经终止的了。但我想可以按您的意思，把不成功的样品先按步骤测一下吸光度，再加入样品中草药，再测一次，看看酶反应终止后，底物释放出的物质与中草药是不是会有进一步的反应。我理解的对吧？呵呵。或者我目前就有底物释放出的物质本身，也可以让它和中草药本身反应一下，看没有吸附作用。

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