主题:【第三届网络原创参赛作品】新反相色谱柱处理、使用和再生

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现在用的最多的就是反相C18色谱柱,在平时的工作中,个人积累了一些小经验,很管用的,在此与大家分享。

1、新柱的处理:我们每次新买的柱子虽然是经厂家测试过并密封好的,可是有的柱子到达手中时已经过很长的时间了,因此,我们每拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。首先,是配制好65%的乙腈/水,再把色谱柱正确的连接在色谱仪上,出口放空(注意:出口端切不可连上检测器,以免污染了检测器),以低流速0.1ml/min~0.5ml/min(如果是LC/MC柱子,则应以0.3 ml/min进行)均可,不可以高流速进行,等看见柱子出口有液体流出后,过20分钟后再接上检测器,以循序渐进的方法将流速调至1.0ml/min(如果是LC/MC柱子则应以0.3 ml/min进行),继续冲洗2~8小时。

2、新柱的使用:首先我们确认所分析样品流动相的PH是不是在色谱柱PH的耐受范围之内,以免损伤柱子!如果,确认在柱子的使用范围之内,就用做样品的流动相平衡柱子(如果流动相中含用缓冲盐溶液,在平衡柱子之前务必要先用5%甲醇或5%乙腈去过渡30分钟以上。再用带盐的流动相去平衡色谱柱。)当色谱柱平衡了足够时间,基线非常平稳的时候,方可进样分析。不管是分析什么样的产品,由于各种各样的因素,样品中总有杂质。因此,最好在色谱柱前端加上保护柱。以增加色谱柱的使用寿命!

3、色谱柱清洗:如果样品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的流动相,在做完样品之后可直接用55%~65%乙腈/水或者用55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟,然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟,即可保存;②如果样品分中流动相里含用缓冲液或酸或离子对试剂的流动相,在做完样品之后的清洗必须按照如下步骤进行清洗柱子:先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水,以1ml/min,冲洗1.5小时以上(如果色谱柱更长,则还需要增加适当时间);然后用55%甲醇/~水65%/水冲洗色谱柱30~60分钟.最后用甲醇或乙腈以1ml/min 冲洗30分钟。

4、色谱柱的再生:当色谱柱用过很长的时间之后,就可能发生柱压力升高、分离度不好、柱效降低、峰形不好等等情况,这时我样就需要对色谱柱进行再生,以延长色谱柱的使用寿命。具体方法有如下两种:
①先用5%甲醇/水或者是5%乙腈/水,把色谱柱反向以1ml/min,冲洗60分钟以上.然后用四氢呋喃以1ml/min冲洗30分钟以上;再用65%甲醇/水或者65乙腈/水,以流速1ml/min冲洗60分钟。最后用纯甲醇或乙腈冲洗30分钟保存即可。
备注:甲醇、乙腈、四氢呋喃均要用质量好色谱纯。水用是重蒸留水。



奖品许愿:希望获得本月的二等奖礼品http://www.instrument.com.cn/activity/2010yc/jp.asp
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weiweixueyiqi
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那是当然,但是如果你的色谱柱实在不行了,那就只有死马当活马医了!!
有水有渝
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楼主要是能加上处理与不处理的比较就好了,还有就是想请教一下这个处理时间这么长,感觉快赶上气相色谱柱的老化了,有什么依据?
dickwang2008
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原文由 weiweixueyiqi(weiweixueyiqi) 发表:
一般情况下色谱柱不能倒着冲吧?


现在很多厂家的色谱柱是可以反冲的,比如菲罗门的就行。
有水有渝
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原文由 dickwang2008(dickwang2008) 发表:
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一般情况下色谱柱不能倒着冲吧?


现在很多厂家的色谱柱是可以反冲的,比如菲罗门的就行。


反冲之前最好还是先咨询一下色谱柱生产商,以防出现意外,特别是入口与出口筛板不一致的。
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从理论上讲,柱子冲的时间越长效果应该越好,毕竟柱子里残留的杂质,不是一下两下就能冲洗干净的,还是需要反反复复长时间才能把它冲洗干净,这就好比"墨西哥湾漏油事件一样",被污染的海面是一天两天能够清理干净的吗?还不是要长期不懈的努力才能整干净!!
有水有渝
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说实话,我从来都没有想柱子有这么娇气,新柱(反相柱)最多用甲醇冲洗20分钟后,直接上流动相(有盐类的话用同比例有机相-水过渡一下),还没有发现因为处理时间短而出现问题,当然,我只是提出疑问,毕竟我没有做过冲洗时间长与冲洗时间短没什么不同。楼主上一个色谱柱再生前后的色谱图对比。
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2010/7/5 19:54:31 Last edit by xky0230699
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