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原文由 wayne172(wayne172) 发表:
梯度淋洗就是梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH，以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。
梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。
如果您是一个物质或者样品基质不是特别复杂，可以用等度洗脱。如果是多组分或者样品杂质较多，可以使用梯度洗脱。这样能够缩短分析时间、改善峰形。一般是先用高水相过渡到高有机相，但具体如何改变，还要看你的物质的出峰时间、分离度、峰形、响应等等。比如说，两个峰不能很好的分开，那么可能需要把这两个峰之前的时间放长些，又比如说如果某个物质在高有机相时响应较好，就尽量将其放在有机相比例高的时候出峰。
梯度的建立方法其实就是方法开发过程。首先根据样品类型选择色谱柱，流动相的选择要麻烦些，LC/MS一般使用反相分离，有机一般是甲醇或乙腈，乙腈的洗脱能力强；水相要考虑PH和缓冲盐，PH一般根据分析物PKa来调，大于或小于PKa2个单位，分析物是酸性是小于，硷则反之，一般使用甲酸、乙酸和氨水；LC/MS的缓冲盐要选择可以气化的，建议甲酸或乙酸氨，使用缓冲盐可以有效的改善色谱表现。建议有机相也要调PH。
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