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主题：【已应助】樣品在LC-PDA有訊號 SQD沒訊號 想問問高手們的建議

浏览0 回复9 电梯直达
nn10325240
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发表于：2012/06/19 14:45:02 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
小弟目前在進行分析時 遇到一個問題 我把現有的條件描述一下

機器 W牌 HPLC-PDA-SQD
mobile phase 碳酸氫銨 5mM /ACN
Column: C8-15cm

我們目前遇到的問題是 一個樣品在進機器分析的時候 PDA圖譜上有訊號,可是SQD上卻沒有訊號

是个别的訊號不出峰, 模式是正离子, 試过柱后一樣不出峰

麻煩的是 這個訊號是一個未知物的訊號,所以不知道是什麼物質

目前的推測是 PDA中看的到 SQD看不到的那個訊號 可能是因為無法離子化所以看不到

,想看看有沒有不知道這樣的問題有沒有前輩們遇到過 該怎麼解決呢?

先謝過大家了
 
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2012/6/19 21:54:39 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
正负离子模式，流动相酸碱性，调一调
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netsking
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2012/6/20 4:22:14 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nn10325240(nn10325240) 发表:
mobile phase 碳酸氫銨 5mM /ACN
 

为什么要用碳酸氢铵呢? 试一试在两中加0.1%FA.
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happy爱米粒
xgy2005
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2012/6/20 12:16:55 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
质谱系统确实很少见到用碳酸氢铵的，正离子模式还是用有机酸比较多
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yzulcl
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2012/6/20 13:50:52 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
理论上来说，单纯依靠LC-ESI-MS，你这个问题存在无解的可能。

举个极端的例子，假设你的样品里面含有这么一个组分“甲苯”，这个大爷在紫外（PDA也好，DAD也罢）检测器上面的响应那是杠杠滴；可是对于ESI-MS检测器而言，那就是个隐身高手，看不见的。

如果不是这么的极端，那么你可以试试正负离子都采集看看，改改流动相的pH看看。流动相的缓冲盐么，推荐【醋酸铵（或甲酸铵）、甲酸（或乙酸）、氨水】的组合。
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nn10325240
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2012/6/21 15:23:31 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
且容小弟娓娓道來~~
我有個藥品本來的分析方法是用 HPLC-PDA,這個分析方法是用磷酸鹽緩衝溶液

因為要分析一個低濃度的不純物 (4ppb)--簡稱A好了,所以要打到500uL的進樣量才能夠看的到A這個訊號.

可是大家都知道本來進樣量只有20uL,當我打到這麼大的進樣量時,很多本來看不到的東西都會出現了.會出現B.C.D.E.F

根據ICH以及美國藥典,這些BCDEF 只要到達20 ppb我就得要去鑑定

要鑑定這麼低濃度的第一個就是用質譜儀,那麼本來用磷酸鹽緩衝溶液就不能繼續用了.

改用碳酸氫銨的原因是因為與磷酸鹽緩衝溶液pKa範圍相近 可以替代

因為藥廠的分析方法多是用HPLC-PDA為主 之後送檢也是以這為主
因而質譜鑑定的部分就得遷就HPLC-PDA

但這麼一來 就會有很多限制不能改

不過看到這麼多前輩給予指導,小弟都會嘗試看看...謝謝大家的溫暖阿




幾位前輩們的建議小弟會去試看看



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continuum
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2012/6/22 20:59:10 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
搞不懂你的说法

20ppb ?
你是大量注射看到的
原始浓度应该也是没  20ppb
怎需要去定性 ...

你该不会是用 标準品的浓度去换算未知物的浓度吧 ?!?!

HPLC-PDA可以

LC-MS 这样搞叫做自找苦吃

没标準品 LC-MS 强度跟浓度关系都可以"看看就好"

...虽然磷酸蛮好用的 ..
有个方式sop 还没finalized之前把HPLC-PDA改成
LC-MS可用..之前有个project就是这样搞
另外你都打到 500uL 都已经是制备级column
倒不如用fraction collector收一收...浓缩作 NMR
除非你心里已经对未知物有底
不然你要用 MS 解未知物...
说真的有点自找麻烦
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2012/6/22 21:01:43 Last edit by continuum
vivian925
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2012/6/29 14:58:50 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有没有APCI源?换个电离模式试试？
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2012/7/2 11:40:06 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多謝大大的建議 小弟把一些回應回答在下面

原文由 continuum(continuum) 发表:
搞不懂你的说法

20ppb ?
你是大量注射看到的
原始浓度应该也是没  20ppb
怎需要去定性
.........這個部分用S/N, S/N=10 就是QL

你该不会是用 标準品的浓度去换算未知物的浓度吧 ?!?!
........這是按照ICH規定, 以分析物濃度的0.1%為基準, 也就是說你分析物濃度的0.1% 要有S/N=10


HPLC PDA可以

LC-MS 这样搞叫做自找苦吃

....沒辦法說,美國客戶要求要鑑定 最好能用MS
NMR要的量大濃度要夠 這不好達成


...虽然磷酸蛮好用的 ..
有个方式sop 还没finalized之前把HPLC-PDA改成
LC-MS可用..之前有个project就是这样搞
另外你都打到 500uL 都已经是制备级column
倒不如用fraction collector收一收...浓缩作 NMR
除非你心里已经对未知物有底
不然你要用 MS 解未知物...
说真的有点自找麻烦


APCI 負離子模式 目前還在測試中 有好消息的話 會馬上來跟大家分享報告 謝謝各位大大
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2013/3/25 9:32:11 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
雖然有點久了~~但還是來報告一下進度好了~

結果小弟發現是毛細管給塞住了 換了毛細管就可以正常分析了
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