主题：【技术交流】婴幼儿食品企业技术人员请进！系列国标；AA、DHA、EPA、核苷酸等探讨

GB/T 5413.2-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 乳清蛋白的测定

感谢这位朋友的上传，我们能把这套标准找全吗？核苷酸的限量和测定是否有国家标准？

GB/T 5413.6-1997婴幼儿配方食品和乳粉  不溶性膳食纤维的测定

GB/T 5413.11-1997婴幼儿配方食品和乳粉  维生素B1的测定

GB/T 5413.19-1997婴幼儿配方食品和乳粉  游离生物素的测定

GB/T 5413.23-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 碘的测定

GBT 5413.24-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 氯的测定

很感动，两位大侠的辛苦上传，现在这套标准还差5个。我都找到了，如下：
GB/T 5413.25-1997婴幼儿配方食品和乳粉 肌醇的测定
GB/T 5413.26-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 牛磺酸的测定
GB/T 5413.28-1997 乳粉 滴定酸度的测定
GB/T 5413.29-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 溶解性的测定
GB/T 5413.30-1997 乳与乳粉 杂质度的测定

原文由 delete1980 发表:
感谢这位朋友的上传，我们能把这套标准找全吗？核苷酸的限量和测定是否有国家标准？

核苷酸 婴幼儿配方粉 0.2－0.58g/kg(以核苷酸总量计） 《中华人民卫生部2005年第15号公告》
现在就差核苷酸的测定方法了。
[转贴资料]
婴幼儿配方奶粉中核苷酸含量的测定方法研究


A method for determination of nucleotides in infant formula milk powder

杨大进　 方从容　 马兰　 王竹天　

摘　要：为检测婴幼儿配方奶粉中胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、次黄嘌呤核苷酸5种核苷酸的含量,建立了奶粉中5种核苷酸的紫外检测器液相色谱法.对试样提取、固相萃取等前处理方式和仪器检测条件进行了研究,试样经0.5%乙酸去除蛋白质,氨基固相萃取柱富集和净化,Symmetry C18柱分离,254 nm紫外检测器液相色谱分析方法定量检测.胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和次黄嘌呤核苷酸的添加回收率分别是90.0%～94.2%、86.4%～93.2%、85.7%～92.6%、90.0%和85.7%～93.3%,相对标准差分别为6.6%、3.4%、8.2%、6.8%和8.2%,检出限分别为0.04、0.05、0.05、0.06和0.04 μg/mL.3年来对30件送检样品的检测显示,检测结果与标示量基本一致.该方法适用于婴幼儿配方奶粉核苷酸含量的分析.
关键词：乳制品;婴儿食品;核苷酸类;色谱法,高压液相
分类号：R15;TS252.51;Q524 　文献标识码：A
文章编号：1004-8456(2003)06-0496-04



基金项目：卫生部保健食品专项基金课题(BJ-01-20)
作者简介：杨大进 男 副研究员
作者单位：杨大进（中国疾控中心营养与食品安全所,北京,100021）　
　　　　　方从容（中国疾控中心营养与食品安全所,北京,100021）　
　　　　　马兰（中国疾控中心营养与食品安全所,北京,100021）　
　　　　　王竹天（中国疾控中心营养与食品安全所,北京,100021）　

参考文献：

［1］张燕婉,鲁红军,王津生.高效液相色谱法测定食品中核苷酸的含量[J].食品科学,1994,6,59─62.
［2］任一平,黄百芬,连国义,等.应用HPLC反相色谱快速测定增鲜味精中的鸟苷酸和肌苷酸[J].食品与发酵工业,1994,6,36─41.
［3］黄晓兰,李科德,陈云华.15种核酸水解产物的高效液相色谱分离及其在酵母抽提物分析中的应用[J].分析化学研究简报,2000,28(12):1504─1507.
［4］马世昌,主编.化学物质辞典[M].西安:陕西科学技术出版社,1999.



收稿日期：2002年12月27日

出版日期：2003年11月30日

1  范围
本方法规定了以液相色谱法测定保健食品中的核苷酸。
本方法适用于作为功效成分添加于婴幼儿配方奶粉中核苷酸的测定。
本方法检出限：胞嘧啶核苷（CMP）0.04μg/ mL、脲嘧啶核苷（UMP）0.05μg/ mL、腺嘌呤核苷（AMP）0.05μg/ mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.06μg/ mL、次黄嘌呤核苷（IMP）0.04μg/ mL。
本方法线性范围：胞嘧啶核苷（CMP）0.992～12.4μg/ mL，脲嘧啶核苷（UMP）1.17～14.6μg/ mL、腺嘌呤核苷（AMP）1.01～12.6μg/ mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.948～12.3μg/ mL、次黄嘌呤核苷（IMP）1.30～16.3μg/ mL。

2  原理
将试样溶解、去除蛋白后, 使用氨基固相萃取柱对核苷酸进行净化富集，根据高效液相色谱紫外检测器在254nm处的响应进行定性定量。

3  试剂
除非另有说明, 在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和双蒸水。
3.1  甲醇  优级纯。
3.2  乙酸。
3.3  磷酸二氢钾。 
3.4  磷酸氢二钾。 
3.5  季铵盐固相萃取柱。
3.6  核苷酸标准储备溶液：准确称量经100℃，4h干燥处理的标准品胞嘧啶核苷（CMP）100mg，脲嘧啶核苷（UMP）、腺嘌呤核苷（AMP）、鸟嘌呤核苷（GMP）、次黄嘌呤核苷（IMP）各40mg，加水定容至100mL。
3.7  核苷酸标准使用液： 将核苷酸标准储备溶液用0.25mol/L,pH=3的磷酸二氢钾稀释100倍。

4  仪器设备
4.1  高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）。

5  分析步骤
5.1  试样处理
5.1.1  准确称取10g试样于100mL容量瓶中，加入约50℃热水80mL，彻底混匀。当试样液达到室温后用水定容至刻度。
5.1.2  准确吸取10mL试样溶液至100mL容量瓶中，加入0.5％乙酸5mL、水10mL，混匀后静置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混匀后过滤，弃去数mL初滤液后收集约30mL滤液。
5.1.3  将季铵盐固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后，再将20mL试样滤液过滤,以1mL水清洗萃取柱，用0.25mol/L,pH=3.5磷酸二氢钾溶液洗脱出5mL滤液。全部过程需要控制流速1滴/秒。
5.2  液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱: C18柱  3.9×150mm。 
5.2.2 柱温：25℃。
5.2.3 紫外检测器：检测波长 254nm。
5.2.4 流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾：0.1mol/L磷酸氢二钾＝480：20。
5.2.5 流速：0.6mL/min。
5.2.6 进样量：10mL。
5.2.7色谱分析：量取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.2.8 保留时间

在上述色谱条件下, 5种核苷酸的保留时间见色谱图, 浓度分别为胞嘧啶核苷（CMP）12.4μg/mL，脲嘧啶核苷（UMP）14.6μg/mL、腺嘌呤核苷（AMP）16.3μg/mL、鸟嘌呤核苷（GMP）12.6μg/mL、次黄嘌呤核苷（IMP）12.3μg/mL。
5.3  分别配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、16.0μg/mL的4种核苷酸标准溶液, 在给定的仪器条件下进行液相色谱分析, 以峰面积对浓度作标准曲线。
1 分析结果表述
6.1 计算
       
式中：X －试样中核苷酸的含量，mg/100g； 
      h1 － 试样峰高或峰面积；
      C － 标准溶液浓度，mg/mL；
      K － 稀释倍数；
      h2 － 标准溶液峰高或峰面积；
      m － 试样量，g。
6.2 结果表示：检测结果保留三位有效数字。
6 技术参数
回收率：回收率在85.0％～96.7％之间。
使用相同方法对同一试样平行测定的绝对差值在10%范围内。