主题：【求助】超微量紫外分光光度及吸光度不准确如何处理？

原文由 longming(chenjinghp) 发表:
一、分光光度计有国家标准管控，既计量器具许可证制度，所以有统一的手段和标准来验证和评价仪器。据我所知，目前市面上的超微量紫外分光光度计都没有计量许可证的，所以仪器的好坏无从评价。
二、光度计的检验都是在10mm光程下进行的，超微量紫外分光光度计的光程一般为1mm或更低，显示的吸光度是靠数据换算成10mm光程下的读数，所以准确度肯定不如普通光度计。

原文由 WUYUWUQIU(wulin321) 发表:
长时间不用，容易损坏

原文由 kingandqueen108(kingandqueen108) 发表:
谢谢。
目前我采购了一台仪器，按分光光度计的标准衡量，那么重铬酸钾标准溶液测试吸光系数就会不通过。
而且仪器波动较大，可能的确是由于光程太小的缘故。但是这是不是说明仪器不稳定？那为何测试蛋白溶液或核酸溶液浓度又重复性较好呢？

原文由 longming(chenjinghp) 发表:
笼统来说超微量紫外分光光度测量会用到两种方法，一是直接测试法和比值法，用的波长无非就是230、260、280nm。
直接测试法，用仪器测试样品吸光度值（超微量紫外分光光度光程）*转换值（转换成标准10mm光程的值）=显示的吸光度值，然后用显示的吸光度值*系数（比如 dsDNA 为260 nm 吸光度× 50；BSA 为A280× 10/ 6.7）=浓度，这种方法吸光度的稳定性和准确性直接关系到浓度的准确。超微量紫外分光光度的空白样的重复性在0.005A左右（我见过的仪器），按标准光度计的标准来看是相当大的，但考虑到测得的吸光度在2.0A甚至10.0A以上时相对准确度还是能为行业接受。
比值法，用230、260、280nm吸光度的比值来表示，260/280来推估 DNA 跟 RNA 的纯度，260/230用来推估核酸纯度，因为是比值的关系，所以仪器的稳定性和准确度对结果的影响较小。

原文由 tutm(tutm) 发表:
不知道这台仪器的说明书里重复性或准确度指标是怎样写的？
你如果要说仪器不合格，那不能超出仪器原来公示的或你们两家约定的技术指标来判定。
如果原来你们还想用于其他要求更高的场合，那只能说你们买的时候就选错型号了。这类超微量紫外分光光度计本来就是为快速而要求不高的用途设计的。

原文由 kingandqueen108(kingandqueen108) 发表:
非常感谢你的回复。
那根据你的经验，用重铬酸钾吸光系数准确度去衡量或评价超微量紫外分光光度计是否合理？若该指标不满足，是否直接说仪器不合格？

原文由 longming(chenjinghp) 发表:
测光度计的吸光度准确度或透射比准确度，会用到重铬酸钾溶液或标准片（忘了具体名称，就是在多个波长点经过标定透过率的玻璃片）。
用重铬酸钾溶液测试的前提是光程为10mm，超微量光度计的光程常见的为1.0和0.2mm不符合检定规程，所以准确性无从谈起。比如重铬酸钾溶液在235nm处的透过率为18.2%，吸光度为0.7399，超微量光度计测得的实际吸光度应该为0.0740再乘以10得到显示的吸光度值，这个过程中如果标准光度计和超微量光度计的噪声水平一样，相对于显示的0.7399吸光度值来说超微量光度计的稳定性不如标准光度计，这也是超微量显得不稳定的原因之一。另外上面假设的情况还没有考虑到光程的变化可能带来吸光度值的非线性变化的误差。
玻璃标准片虽说没有光程的问题，但其厚度都大于1mm，所以也没法用来鉴定超微量光度计。
其实重铬酸钾溶液和玻璃标准片同时检定同一台仪器时也会出现结果不一致的情况。