紫外可见分光光度计(UV)

主题:【求助】超微量紫外分光光度及吸光度不准确如何处理?

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longming
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原文由 longming(chenjinghp) 发表:
测光度计的吸光度准确度或透射比准确度,会用到重铬酸钾溶液或标准片(忘了具体名称,就是在多个波长点经过标定透过率的玻璃片)。
用重铬酸钾溶液测试的前提是光程为10mm,超微量光度计的光程常见的为1.0和0.2mm不符合检定规程,所以准确性无从谈起。比如重铬酸钾溶液在235nm处的透过率为18.2%,吸光度为0.7399,超微量光度计测得的实际吸光度应该为0.0740再乘以10得到显示的吸光度值,这个过程中如果标准光度计和超微量光度计的噪声水平一样,相对于显示的0.7399吸光度值来说超微量光度计的稳定性不如标准光度计,这也是超微量显得不稳定的原因之一。另外上面假设的情况还没有考虑到光程的变化可能带来吸光度值的非线性变化的误差。
玻璃标准片虽说没有光程的问题,但其厚度都大于1mm,所以也没法用来鉴定超微量光度计。
其实重铬酸钾溶液和玻璃标准片同时检定同一台仪器时也会出现结果不一致的情况。
你说的其实是如何检定超微量光度计的问题,如之前所说光度计属计量器具,国家有相应的检定标准,但超微量光度计是近些年出现的还没有纳入标准,所以也没有相应标准可执行。因为光程和测试样品的吸光度范围不一样,用标准光度计检定方法会有多大误差无从确定。即便我们能讨论出我们认为可行的检定方法,也不会为国标承认。所以仪器准不准是一回事,符不符合标准是另一回事。
WUYUWUQIU
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原文由 kingandqueen108(kingandqueen108) 发表:
谢谢版主。
你的意思是微量紫外分光光度计长时间不用,容易损坏?
其实目前来说,测量蛋白浓度稳定性还可以,就是测试重铬酸钾溶液波动较大(不同时间测试结果的波动可以达到5%左右)。
另外,想问问,微量紫外风光光度计的检验是否有标准?是否能够用常规的紫外分光光度计的标准来进行?
谢谢~
可以用标样试一下
mengzhaocheng
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鱼和熊掌不可兼得,超微量测试能够应用于那种样品量很小的情况,自然准确率会稍微差一些
yzx2011
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小虾米
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微量紫外分光光度计长时间不用,是容易损坏的。会发霉
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