主题：【原创】自信源于中国制造（二），月旭Xtimate phenyl-Hexyl（HS）测定某物质有关物质

自信源于中国制造（二），月旭Xtimate phenyl-Hexyl（HS）测定某物质有关物质
本品为孟鲁司特钠，处方药，由默沙东公司（在美国和加拿大被称为默克）研发、生产。顺尔宁于1999年，获得中国国家食品药品监督管理局批准正式上市。

孟鲁司特钠是一种口服的白三烯受体拮抗剂，能特异性抑制气道中的半胱氨酰白三烯(CysLT1)受体，从而达到改善气道炎症，有效控制哮喘症状。

孟鲁司特钠是非激素类抗炎药，适用于成人和1岁以上儿童哮喘的预防和长期治疗及过敏性鼻炎的治疗，具有三种不同的规格。根据我国《支气管哮喘防治指南》2008年版推荐，白三烯调节剂是除吸入激素外，惟一可单独应用的长期控制药，可作为轻度哮喘的替代治疗药物和中重度哮喘的联合治疗用药。
其分子结构式信息如下：

本品品种采用EP、JP、USP标准和中国药典委员会征求意见稿方法进行摸索其有关物质，标准详见下图和文字：

EP8.0质量标准：

JP17版本质量标准：

USP质量标准色谱方法：
溶剂: 甲醇-水 (3:1)
流动相A：0.2%三氟乙酸水溶液
流动相B：甲醇-乙腈（3:2）
时间程序：见表1.
表 1

时间（min）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	48	52
5	45	55
12	45	55
22	25	75
23	25	75
25	48	52
30	48	52

对照品溶液：稀释为0.033 mg/mL美国药典孟鲁司特二环己基胺标准品溶液
系统适用性溶液：精密量取对照品溶液10ml至10ml容量瓶中，加入4μl过氧化氢，混合摇匀。使容量瓶曝光在4小时环境光或10分钟4klx的白色冷光下
灵敏度溶液：将对照品溶液稀释为0.033μg/mL美国药典孟鲁司特二环己基胺标准品溶液。
样品溶液（对于4mg规格咀嚼片）：名义值为0.24 mg/mLmg孟鲁司特溶液，配置如下。将12片咀嚼片转移至合适的容量瓶中，加入75%体积的溶液，用力震摇60分钟，用溶剂稀释至体积。将部分溶液使用0.45μm微孔滤膜过滤，弃头滤液1ml，取滤液。
样品溶液（对于5mg规格咀嚼片）：名义值为0.25 mg/mLmg孟鲁司特溶液，配置如下。将10片咀嚼片转移至合适的容量瓶中，加入75%体积的溶液，用力震摇60分钟，用溶剂稀释至体积。将部分溶液使用0.45μm微孔滤膜过滤，弃头滤液1ml，取滤液。
色谱系统
（见色谱法，系统适用性。）
模式：液相
检测器：紫外波长255nm
色谱柱
保护柱：3.0-mm ×4-mm; 键合苯基多孔硅胶微球固定相
分析：4.6-mm ×10-cm; 键合苯基多孔硅胶微球固定相
柱温：50℃
进样体积：20μl
分析时间：孟鲁司特保留时间的2倍时长
系统适用性
样品：对照品溶液、系统适用性溶液和灵敏度溶液

适用性要求
分离度：系统适用性溶液的分析结果，顺式异构体和孟鲁司特之间的分离度不得小于1.5
相对标准偏差：对照品溶液五次进样的结果偏差值不得超过0.2%
信噪比：灵敏度溶液结果较噪音不小于10倍
分析
样品：对照品溶液和样品溶液
计算部分咀嚼片中孟鲁司特(C₃₅ H₃₆ClNO₃S).标示含量的百分比：
结果 = (r_U /r_S)× (C_S /C_U) × (M _r1/M _r2) × 100
r_U =样品溶液的峰值响应
r_S =对照品溶液的峰值响应
C_S=对照品溶液中孟鲁司特二环己基胺标准品的浓度(mg/mL)
C_U=样品溶液中孟鲁司特的名义浓度
M _r1=孟鲁司特的分子量，586.18
M _r2=孟鲁司特二环己基胺标准品的分子量，767.50
验收标准：92.5%-107.5%。
综上，其色谱柱和我们现在普通通用性色谱柱还是有很大差异，这些因素会给我们分析采用普通色谱柱会带来一些困惑和困难。后来我们采用中国药典委员会征求意见稿方法，其方法为：

根据上述条件，我们采用月旭公司的色谱柱进行试验摸索，其典型色谱图如下：
1.征求稿测定其已知杂质甲基苯乙烯，难点就是这个杂质，在EP是检测不出明显的色谱峰的。

备注：保留时间为27.354分钟色谱峰为甲基苯乙烯杂质。
接着进样已知杂质混合液：

备注：时间为6.507分钟为亚砜杂质、12.768分钟为顺式异构体、15.638分钟为孟鲁司特钠主峰、16.479分钟为酮基甲醇杂质、27.327分钟为甲基苯乙烯杂质。
色谱峰表统计表：

上统计表显示，各杂质分离度均达到基线分离，理论板数均大于2000，拖尾因子均较好。
2.采用EP8.0，其各已知杂质如下：
顺式异构体：

备注：保留时间为9.925分钟为顺式异构体，11.668分钟为孟鲁司特钠主峰。其分离度、拖尾因子、理论板数均优异。
亚砜杂质：

备注：保留时间为5.767分钟为亚砜杂质，其拖尾因子勉强，其他均较好。
酮基甲醇杂质：

备注：保留时间12.319分钟为酮基甲醇杂质，其峰形良好。
混合杂质：

备注：时间为5.763分钟为亚砜杂质、9.924分钟为顺式异构体、11.672分钟为孟鲁司特钠主峰、12.320分钟为酮基甲醇、我们的甲基苯乙烯杂质峰没有出现，后经证实因响应值较低没有显示出来，其母液色谱峰变形。
3.USP情况：
顺式异构体：

备注：时间为9.661分钟为顺式异构体、10.570分钟为孟鲁司特钠主峰。其色谱参数均良好。
酮基甲醇：

备注：保留时间10.995分钟为酮基甲醇杂质。
甲基苯乙烯：

备注：保留时间20.045分钟为甲基苯乙烯杂质。
混合杂质：

以上色谱图，酮基甲醇和孟鲁司特钠主峰分离不好。
保留时间为：5.128分钟为亚砜杂质、9.628分钟为顺式异构体、10.551分钟为孟鲁司特钠主峰、10.961分钟为酮基甲醇、20.022分钟为甲基苯乙烯杂质。
结语，通过月旭公司的色谱柱进行本品有关物质试验摸索，找到比较适合分离亚砜、顺式异构体、酮基甲醇和甲基苯乙烯杂质，我们一致相信贵公司的色谱柱的质量和通用性较强，故选择此款色谱柱，另外再此感谢月旭公司的陈老师的推荐意见，让我们能有效快速进行试验，如果色谱柱选择不对，开展项目将会走一段时间的。
月旭公司提供的色谱图（顺式异构体）：


此品种还有很多条件去摸索，特别是柱温的影响也是很大，关键是酮基甲醇和孟鲁司特钠主峰的分离度和甲基苯乙烯杂质的快速出峰时间，都是一个需要权衡的问题。
采用USP等度洗脱30℃主峰，甲基苯乙烯典型色谱图：

备注：保留时间为106.097分钟为甲基苯乙烯。

再次感谢月旭公司及老师们和关注本版的战友们，衷心祝愿大家新年快乐，爱您已发（2018）！