CAPCELL PAK ADME
键合金刚烷基色谱柱的使用攻略
在常规液相色谱分析中,反相C18(ODS)色谱柱可满足绝大多数化合物的分析。但是大家应该也遇到过强极性物质保留弱/不保留的情况。这种情况下,一般的思路是:
★调整流动相
★尝试其他种类反相柱(C8、C4、CN、C1等)
★在100%水相流动相条件下,使用高极性色谱柱进行分析
★改变分离模式——从反相模式到HILIC模式
上面的方法对于极性化合物的分析也许有效,但如果是强极性化合物和疏水性化合物共同分析,怎么办?有个简单有效的方法,您想尝试吗?
在原来开发的反相条件下,仅通过更换色谱柱,就能对多种极性不同的化合物进行同时分析,且能得到良好保留与分离,如果您有这种需求——
CAPCELL PAK ADME色谱柱
你、值得拥有~
一、金刚烷基填料的特长
CAPCELL PAK ADME色谱柱键合立体笼状结构官能团——金刚烷基团,因此具有与常规C18色谱柱完全不同的表面特性,在极性较强化合物的分析中有独特的优势,兼具疏水选择性和笼状结构的立体选择性,能够对一些具有微小差异的化合物进行有效分离,在药物代谢分析中也表现出明显的优势。
键合立体笼状结构官能团——金刚烷基团
同时采用聚合物包被技术进行表面处理
兼具高表面极性和一定疏水性
适用于高极性物质和疏水性物质的共同分析
▲CAPCELL PAK ADME色谱柱和常规C18色谱柱对10种标准物质的分析色谱图
如上图,可以看到,具有极性部位的苯甲酸甲酯保留程度较苯更强。CAPCELL PAK ADME色谱柱对强极性化合物(峰1-4)具有较强保留,同时,对萘的保留程度与C18色谱柱相当。
同时我们注意到,苯甲酸甲酯和苯在C18与ADME色谱柱上的出峰顺序也发生了翻转,也印证了ADME与C18截然不同的保留模式,而这种特殊的保留模式,也许将为您的分析带来意想不到的收获。
CAPCELL PAK ADME色谱柱在对极性化合物进行良好保留的同时,对疏水性化合物也能有良好保留。
二、ADME与常规C18柱的比较
CAPCELL PAK ADME色谱柱可在反相模式下使用,因具有特殊的疏水性和表面极性,所以可以实现常规C18色谱柱所无法实现的分离。
下面将通过黄嘌呤类化合物和色氨酸代谢物的两个分析例,将ADME与常规C18色谱柱的分析行为进行比较。
以下两个数据中对比用色谱柱分别为以下色谱柱:
★CAPCELL PAK ADME S5色谱柱
★CAPCELL PAK ADME S3色谱柱
★常规的5 μm粒径C18色谱柱
★可在100%水相条件下使用的5 μm粒径C18色谱柱(高极性C18色谱柱)
黄嘌呤类化合物的分析(等度)
对咖啡因,可可碱,茶碱和他们的代谢产物——1,7-二甲基尿酸,1-甲基黄嘌呤及3-甲基黄嘌呤进行共同分析,结果表明,CAPCELL PAK ADME色谱柱所得分离度和理论塔板数均较好,与常规C18色谱柱和高极性C18色谱柱相比,对高极性化合物能得到更好的保留与分离。
▲CAPCELL PAK ADME和C18色谱柱对黄嘌呤类化合物的分析色谱图
【色谱条件】
色谱柱规格:4.6 mm i.d. x 150 mm
流动相:0.1 vol% 甲酸, 水 / 乙腈 = 90 / 10
流 速:1 mL/min
柱 温:40 ˚C
检测器:UV 254 nm
进样量:5 μL
样 品:1. 3-甲基黄嘌呤 2. 1-甲基黄嘌呤 3. 可可碱 4. 1,7-二甲基尿酸
5. 茶碱 6. 咖啡因
犬尿氨酸代谢路径中色氨酸代谢产物的分析(梯度)
在梯度条件下对色氨酸及其代谢产物进行分析,CAPCELL PAK ADME色谱柱对极性较强的代谢产物得到良好保留与分离,此数据表明ADME也非常适合梯度分析。
▲CAPCELL PAK ADME和C18色谱柱对色氨酸代谢产物的分析色谱图
【色谱条件】
色谱柱规格:ADME S3; 4.6mm i.d. x 100 mm
ADME S5; 4.6 mm i.d. x 150 mm
流动相:A) 10 mmol/L 甲酸铵缓冲液(pH4) B) 乙腈
ADME S3:B 5% (0 min) -> 25% (13.3 min)-> 5% (13.4 min)
ADME S5:B 5% (0 min) -> 25% (20.0 min)-> 5% (20.1 min)
流 速:1 mL/min
柱 温:40 ˚C
检测器:UV 254 nm
进样量:1 μL
样 品:1. 尿嘧啶 2. 3-羟基犬尿氨酸 3. 犬尿氨酸 4. 色氨酸 5. 3-羟基-2-氨基苯甲酸 6. 邻氨基苯甲酸
三、CAPCELL PAK ADME的保留行为
CAPCELL PAK ADME对于强极性化合物能实现良好保留与分离,下图为对实际生药样品的保留。
▲CAPCELL PAK ADME色谱柱和C18色谱柱对天然物质(生药)的分析色谱图
【色谱条件】CAPCELL PAK ADME S3色谱柱与C18色谱柱相比,整体保留更强,且能得到更好分离。
四、使用CAPCELL CORE ADME快速分析
分别使用全多孔型填料的CAPCELL PAK ADME和核壳型填料的CAPCELL CORE ADME两款色谱柱,对胆固醇生物合成路径的8种甾类激素和炔雌醇进行分析。
▲胆固醇生物合成路径
▲8种甾类激素和炔雌醇的分析色谱图
【色谱条件】
色谱柱:①CAPCELL PAK ADME S5 ; 4.6 mm i.d. x 150 mm
②CAPCELL CORE ADME S2.7 ; 2.1 mm i.d. x 50 mm
流动相:A) 5 mmol/L 甲酸铵 B) 乙腈
① B 20 %(0 min) -> 55 %(30 min) -> 20 % (30.1 min)
② B 20 %(0 min) -> 55 %(10 min) -> 20 % (10.1 min)
流 速:① 1 mL/min② 400 μL/min
柱 温:40 ˚C
检测器:UV 220 nm
进样量:① 5 μL② 25 μL
样 品: 1. 醛固酮 2. 氢化可的松 3. 可的松 4. 泼尼松龙 5. 雌二醇 6. 睾酮 7. 雌酚酮 8. 炔雌醇 9. 17α-羟孕酮
将CAPCELL CORE ADME色谱柱的流速提升一倍时,可得到与CAPCELL PAK ADME色谱柱同等程度的分离效果,缩短分析时间。
因此,如果您使用CAPCELL PAK ADME色谱柱开发了合适的分析方法,直接将色谱柱更换为CAPCELL CORE ADME,同时提高流速,这样的做法可以实现快速分析,提高分析效率。
五、CAPCELL CORE ADME对肽类的分析
四肽Arg-Gly-Asp-Ser是细胞吸附性蛋白质所共有的细胞吸附活性配列 (Arg-Gly-Asp)。以下是四肽和五肽的分析示例。
▲CAPCELL CORE ADME色谱柱对肽类的分析色谱图
【色谱条件】
色谱柱规格:2.1 mm i.d. x100 mm
流动相:A) 0.1 vol% 三氟乙酸, 水
B) 0.1 vol% 三氟乙酸, 乙腈
B) 1%(0 min) -> 10%(10 min) ->1%(10.1min)
流 速:200 μL/min
柱 温:35 ˚C
检测器:PDA 210 nm
进样量:1 μL
样 品:1. 四肽 Arg-Gly-Asp-Ser (M.W. 433.4)
2. 五肽 Gly-Arg-Gly-Asp-Ser (M.W. 490.5)
对强极性小分子肽得到了充分保留,四肽与五肽得到了良好分离。
—————————————————————————————————————————————————————————
综上,我们对导入金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME色谱柱对于极性化合物的保留行为进行了考察,可以看出CAPCELL PAK ADME色谱柱对强极性化合物的保留作用良好。
另外,核壳型色谱柱CAPCELL CORE ADME对于强极性化合物也能得到良好的保留与分离,通过分析条件平移,可实现较CAPCELL PAK ADME色谱柱更快速的分析。
因此可以得出结论,CAPCELL PAK ADME和CAPCELL CORE ADME色谱柱可以对常规C18色谱柱所无法保留的强极性化合物进行良好保留,并且因其能在反相模式下使用,故可作为改善C18色谱柱分离效果的“第二选择”色谱柱。
- 总结 -