主题：【分享】又爱又恨的小妖精-Tskgel SW系列色谱柱

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发表于：2018/11/30 22:08:17 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

Tskgel SW系列色谱柱产自TOSOH，是较早进入国内市场的一款硅胶基质的水相分子尺寸排阻色谱柱。想必不少论友对它是又爱又恨；爱它是因为它键合了亲水性二醇基官能团，能极大的保护硅表面不与蛋白样品相互作用，且它的低吸附作用和均匀的孔径分布能实现蛋白质的高效分离；恨它就是因为它短命。
我们实验室用TOSOH家的色谱柱十几年了，各款式都有用过，现在分享一些Tskgel SW系列的使用技巧，尽可能的延长它的寿命。
当我们收到一根新的色谱柱的时候，最好首先要对它进行柱效测定，可能会有论友有说，不是每根色谱柱出厂都有厂家附带的出厂报告么? 是的，每个色谱柱出厂的时候都会有一份厂家报告，但是有可能这份厂家报告是测了一段时间的报告；你对它进行柱效测定，是你一开始了解这个色谱柱好坏的第一印象（是存在一定的小概率事件，拿到手的新柱子性能并不是特别好）。这里我推荐大家参考两个值：理论塔板数和对称因子；测得的理论塔板数比厂家报告低一些没关系（最好不要超过50%），对称因子一般0.8~1.5（一开始就太拖尾的柱子，你们会接受么？）
我们现在来说说哪些可以避免它短命的一些操作：
1.溶剂准备：使用HPLC级别的纯溶剂，如有必要，进行过滤。保证溶剂的相溶性，避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。
2.样品准备：过滤样品，确保样品中不含固体颗粒（避免对柱子填料的损伤），可用流动相或者超纯水溶解样品。
3.在日常实验的时候，流速最好缓慢上升，由于流速过快的话，会造成柱内压力升高过快，这样会降低色谱柱的性能。（能设加速度的就设置加速度，不能设置加速度的就
以0.2ml/min的形式，手动进行升速）
4.防止气体进入色谱柱。我们都知道凝胶柱是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此，为了防止气泡进入色谱柱，一定要使用经过
脱气的流动相或者仪器配置在线脱气机。
5.实验结束后，如果短时间内不使用，可以保存在水溶液或缓冲液中（3天以内）；否则采用0.05%proclin200进行保存（每3个月更换一次，官方有数据支持），主要是为
了防止滋生微生物和／或腐蚀性缓冲液可能会导致腐蚀，降低色谱柱的性能。
6.色谱柱推荐保存在4～30℃范围内常温保存。请勿将色谱柱保存在 4℃或 4℃以下冰箱中，以免冷冻色谱柱内的溶剂。
7.它的pH耐受范围较窄，在2.5-7.5之间使用，高pH会逐渐溶解它本身的硅胶基质，而低pH会影响它硅胶基质本身的稳定性。
8.关于实验盐浓度的推荐：一般在0.5M以下，如果盐浓度过高，会导致粘度上升和沉淀；影响柱子寿命。
9.由于色谱柱是采用不锈钢管的材质，应尽量避免接触卤离子。
10.如有必要使用含有有机相的水溶液，最好不要超过20%的有机相，长时间使用高有机相会降低色谱柱的效率。
最后附送一些由于吸附造成的清洗方法
1）离子性吸附（清除离子性杂质）
通过提高清洗液的盐浓度（通常 0.5 mol/L）进行过柱清洗。
使用酸性水溶液，如磷酸盐缓冲液（pH 2.5）过柱清洗。
2）疏水性吸附（清除疏水性杂质）
在清洗液中添加甲醇、乙腈（10-20 %）等水溶性有机溶剂进行过柱清洗。
本法请注意缓冲液中盐的析出。
3）氢键吸附（清除难溶的蛋白质或其他物质）
在清洗液中添加 6-8 mol/L 的尿素或 0.2-0.3 %的中性表面活性剂（Triton、Tween、Brij 等）后进行过柱清洗。但需要注意尿素及表面活性剂的柱中残留。
希望大家手中的色谱柱各个都长长久久！

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