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液质联用（LCMS）

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主题：【已应助】采用GB/T 22388-2008中液质串联法测定三聚氰胺存在的问题

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发表于：2020/12/01 21:25:24 楼主管理分享正序浏览只看楼主回复私聊

近期接触到奶粉、液态奶中三聚氰胺项目的检测，采用的方法是GB/T 22388-2008中第二法——液质串联法，下面总结一下所遇到的问题及解决思路，希望大家可以一起探讨指教。

一、前处理方面

1.1 待测样品中蛋白沉淀不够测定

GB/T 22388-2008中第二法的前处理过程为待测样品加入8mL的1%三氯乙酸加2mL乙腈，去除蛋白和提取待测液，涡旋高速离心后（9000r/min）。部分待测样品仍然十分浑浊，尤其是奶粉样品，导致后期的滤纸过膜和过柱难以进行。

解决思路：1）对离心后仍浑浊的样品上清，进行过0.45μm的水膜；已试过，效果不好

2）改变提取液和蛋白沉淀的浓度和种类。如a.提高三氯乙酸的浓度，增加至3%或者5%；b.改变三氯乙酸和乙腈的比例;c.增加蛋白沉淀剂亚铁氰化钾和乙酸锌。

1.2 空白样品有干扰

大部分实验中所做的空白，均能检出三聚氰胺，但其含量很低，一般为几个PPm左右。

解决思路：对整个实验过程进行排除。1）整个过程中的试管均换为全新的试管；2）进行过柱与未过柱样品之间的比较，来判断是否由柱子引入的干扰。

1.3 外标曲线的线性不好

因目前手上暂无空白的基质样品，所以是采用的试剂标准曲线，发现奶粉和液体乳样品的基质效应很强，且为抑制效应。

解决思路：已采购13C3三聚氰胺同位素，来进一步地进行定量。

近期12月中旬会开始会这些问题进行一一优化和思路验证，后期会把结果一一附上。同时也希望大家可以提出宝贵的意见和经历。

推荐答案：hujiangtao回复于2020/12/02

“一般为几个PPm左右”这个数据已经很高了，可能还是前处理过程中使用的离心管等带入的

对于奶粉样品可以在三氯乙酸溶液中加入5%乙酸铅除蛋白效果还不错，上清液浑浊的话可以用滤纸过滤以后再过MCX柱

现在正常市面上买的液态奶和奶粉不大可能含有三聚氰胺的，可以作为空白配置基质曲线，或者如楼主用的同位素内标法都是解决基质效应很好的方式

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2020/12/10 15:25:20 6楼管理分享正序浏览只看楼主回复私聊

原文由 weiqing(weiqing1983) 发表:一万转离心，上清液如果还是有点浑浊，我们是过密理博的0.45PTFE滤膜后过柱净化，此外，三聚氰胺最好用内标法定量，外标法仪器响应不稳定。

这个材质的是水系的还是有机的呢？

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2020/12/10 15:24:08 5楼管理分享正序浏览只看楼主回复私聊

原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表: 乙酸铅基本都沉淀到蛋白里面了，一般不会影响目标物在MCX柱上富集的，我们考核时都是这么做不影响回收率的。滤纸用那种快速过滤的，能起到一些作用

好的，谢谢老师，最近做实验验证一下。

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hujiangtao

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2020/12/2 12:52:56 4楼管理分享正序浏览只看楼主回复私聊

原文由 p3124248(p3124248) 发表:

谢谢，老师的解答。目前我们也在考虑是否是离心管及过柱引入的。

老师。你说的乙酸铅，我是看GC-MS第三法中所用到的，但是我会有一个担心，解离出来的铅离子是否会与后期阳离子交换柱结合，影响三聚氰胺的富集。对于亚铁氰化钾和乙酸锌的使用也存在这样的担心。前处理中我们也进行了滤纸过滤这一块，但是有些连滤纸都过不下去的。

乙酸铅基本都沉淀到蛋白里面了，一般不会影响目标物在MCX柱上富集的，我们考核时都是这么做不影响回收率的。滤纸用那种快速过滤的，能起到一些作用

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2020/12/2 12:53:54 Last edit by hujiangtao

weiqing

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2020/12/2 12:24:54 3楼管理分享正序浏览只看楼主回复私聊

一万转离心，上清液如果还是有点浑浊，我们是过密理博的0.45PTFE滤膜后过柱净化，此外，三聚氰胺最好用内标法定量，外标法仪器响应不稳定。

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2020/12/2 11:38:11 2楼管理分享正序浏览只看楼主回复私聊

原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
“一般为几个PPm左右”这个数据已经很高了，可能还是前处理过程中使用的离心管等带入的

对于奶粉样品可以在三氯乙酸溶液中加入5%乙酸铅除蛋白效果还不错，上清液浑浊的话可以用滤纸过滤以后再过MCX柱

现在正常市面上买的液态奶和奶粉不大可能含有三聚氰胺的，可以作为空白配置基质曲线，或者如楼主用的同位素内标法都是解决基质效应很好的方式

谢谢，老师的解答。目前我们也在考虑是否是离心管及过柱引入的。

老师。你说的乙酸铅，我是看GC-MS第三法中所用到的，但是我会有一个担心，解离出来的铅离子是否会与后期阳离子交换柱结合，影响三聚氰胺的富集。对于亚铁氰化钾和乙酸锌的使用也存在这样的担心。前处理中我们也进行了滤纸过滤这一块，但是有些连滤纸都过不下去的。

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