前言

微囊藻毒素(Microcystin，MC)是一类具有生物活性的环状七肽化合物，为分布最广泛的肝毒素。其具有相当的稳定性，它能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性，还是强烈的肝脏肿瘤促进剂。中国生活饮用水卫生标准（GB 5749-2006）的颁布实施对水源水的质量提出了更高的要求。

本文参照“GB/T 20466-2006水中微囊藻毒素的测定”利用 Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统对水中的微囊藻毒素-LR进行固相富集萃取，采用液相色谱进行检测，建立了一套水中微囊藻毒素-LR的检测方法，且方法的回收率及平行性良好，适合水中微囊藻毒素-LR的检测。

关键词

Sepaths UP全自动固相萃取系统，水，微囊藻毒素-LR， GB/T 20466-2006

1、设备及试剂

Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统；

高效液相色谱仪：LC600 二元高压梯度高效液相色谱；

标样：微囊藻毒素-LR标准物质（农业部环境保护科研监测所，20μg/mL，溶剂：甲醇）；

标样工作液：将20μg/mL标样用甲醇稀释至浓度为2μg/mL；

甲醇（色谱纯， Fisher Chemical）

三氟乙酸（分析纯）

磷酸二氢钾（分析纯）

磷酸（分析纯）

超纯水

固相萃取柱（Labtech C18 500mg/6mL）

磷酸二氢钾溶液（0.05mol/L）：称取6.8g磷酸二氢钾，用水溶解，定容至1000.0mL

磷酸盐缓冲液：用20%（体积分数）磷酸溶液将磷酸二氢钾溶液调至pH到3

洗脱液：用甲醇将0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL

2、测试过程

2.1 样品准备

1000.0mL 纯净水中加入200μL的 2μg/mL 微囊藻毒素-LR标准工作液。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示的方法进行Sepaths UP方法编辑，并加载方法到相应通道。Sepaths UP进行2.1中样品的SPE富集过程。

收集样品到收集瓶中，然后进行氮吹浓缩，当收集液浓缩到近干时，加入流动相定容到1.0mL，取出样品待检测。

图1 微囊藻毒素-LR SPE富集方法

2.3 HPLC检测方法

色谱柱：Promosil C18反相柱，5μm，4.6*250mm；

波长：238nm；

流速：1mL/min；

柱温：35℃；

进样量：20μL；

流动相：甲醇：磷酸盐缓冲溶液= 65：35

3、测试结果

3.1 0.4ppm微囊藻毒素-LR混标色谱图

图2为浓度为0.4ppm的微囊藻毒素-LR混标色谱图。

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图2 0.4ppm微囊藻毒素-LR混标色谱图

3.2 加标样品色谱图

图3为加标样品的色谱图。

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图 3 加标样品色谱图

3.3 加标回收率

表1为加标回收率结果，微囊藻毒素-LR类化合物的回收率在92.21~98.61%。

表1 加标回收率结果

标样	4 组平行样回收率，%				RSD，%
标样	1	2	3	4	RSD，%
微囊藻毒素-LR	93.75	92.21	98.61	93.82	2.93

4、结果与讨论

本方法参考GB/T 20466-2006方法，使用Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统对水中微囊藻毒素-LR进行了富集固相萃取，利用液相色谱进行检测，得到方法回收率为92.21~98.61%。且通道间的平行性良好，适合水中微囊藻毒素-LR的检测。

参考标准

GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的测定