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主题：【已应助】求助！液相梯度洗脱程序优化

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发表于：2023/03/10 09:39:34 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最近刚开始接触液相操作，现遇到一些问题想向大家请教，非常感谢！
本人用的是岛津的LC-20A，柱子是安捷伦C18柱，流动相A：0.1%三氟乙酸溶液，流动相B：乙腈（含0.1%三氟乙酸）
目前想通过液相分离出我制的样品中的未知多肽，一开始所用程序为图1，柱温30℃，流速0.8ml/min

但这个程序下跑出来的效果很差（见图2），25min后的峰出现重叠，分不开。因为我用多肽标品跑样观察到出峰时间大概在25min-50min，所以我改变了一下梯度洗脱的程序，重新试了一下，发现峰分开了些，但感觉基线漂移严重，见图3（新程序见图4）

想请教一下大大我这个程序设置还可以如何优化一下？非常感谢！

推荐答案：安平回复于2023/03/10

梯度洗脱伴随基线漂移，一般情况下是正常现象，不需要处理。

但是梯度空白不应该存在鬼峰。如果有，重点怀疑流动相为好。

楼主的目标物质是哪一个？详细说明样品情况为好。

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2023/3/10 11:26:22 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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joufe

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2023/3/10 14:35:33 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

液相梯度优化，建议先采用大范围梯度，如开始几分钟采用高比例水相（95%），接下来将有机相比例提高（70%），如在此比例待测成分可以被洗脱，可以再此比例保持几分钟，如样液中还有未被洗脱的杂质，可以进一步提高有机相比例将其洗脱下来，以免污染色谱柱或者后面洗脱后干扰检测。针对您现有的梯度条件，有几点建议：一是初始比例建议增加一些有机相，C18色谱柱若未封端处理不建议纯水相跑，而且看出峰时间在三十分钟后，所以前段纯水相运行20分钟建议调整；二是流动相比例调整先大范围，确定峰位再根据出峰情况，针对某一段梯度进行细调

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2023/3/10 16:30:30 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 joufe(joufe) 发表:
液相梯度优化，建议先采用大范围梯度，如开始几分钟采用高比例水相（95%），接下来将有机相比例提高（70%），如在此比例待测成分可以被洗脱，可以再此比例保持几分钟，如样液中还有未被洗脱的杂质，可以进一步提高有机相比例将其洗脱下来，以免污染色谱柱或者后面洗脱后干扰检测。针对您现有的梯度条件，有几点建议：一是初始比例建议增加一些有机相，C18色谱柱若未封端处理不建议纯水相跑，而且看出峰时间在三十分钟后，所以前段纯水相运行20分钟建议调整；二是流动相比例调整先大范围，确定峰位再根据出峰情况，针对某一段梯度进行细调

非常感谢！那我从开始跑程序即增加小比例的有机相也是可以的吧，然后当我确定了峰位置时再细调的时候，可以5%的比例甚至2-3%的比例调整吗？

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