主题:【已应助】方法开发应该怎么做呀?

浏览0 回复4 电梯直达
Ins_8b120bfe
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我本科生小白,以甲醇-0.4%磷酸水溶液为流动相,设置了一个梯度甲醇35%跑5分钟,40%跑9分钟,45%跑了4分钟,35%跑4分钟,感觉起码出了峰
推荐答案:通标小菜鸟回复于2024/01/17
方法开发是一个要求前期准备比较充足的过程,首先要对自己测试的化合物的化学性质有所了解,然后根据化合物类型来选择合适的色谱柱。对于未知的物质,一开始就建议用C18长柱,250mm的,C18柱在液相分析中适用于大多数物质。选好色谱柱后就是流动相,如果你能找到类似的文献作为参考就再好不过了,楼主的梯度洗脱变化范围太小,建议初始低有机相,高水相,比如95%甲醇,5%磷酸水溶液,然后慢慢提高有机相,最后再恢复至初始比例进行平衡。
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这梯度..............跟等度也没啥区别了呀,而且峰几乎全部都5min前出来了,不合适
通标小菜鸟
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方法开发是一个要求前期准备比较充足的过程,首先要对自己测试的化合物的化学性质有所了解,然后根据化合物类型来选择合适的色谱柱。对于未知的物质,一开始就建议用C18长柱,250mm的,C18柱在液相分析中适用于大多数物质。选好色谱柱后就是流动相,如果你能找到类似的文献作为参考就再好不过了,楼主的梯度洗脱变化范围太小,建议初始低有机相,高水相,比如95%甲醇,5%磷酸水溶液,然后慢慢提高有机相,最后再恢复至初始比例进行平衡。
通标小菜鸟
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摸条件的时候可以把洗脱程序设置长一点,确保所有目标物均出峰,到后期可以再优化缩短分析时间。
xiaolanzi5
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先试高比例有机相等度洗脱,出峰后,不同浓度标准品进样,判断峰面积是否成比例从而确定目标峰。优化流动相比例包括梯度洗脱要看添加回收准确性和精密度,以及目标峰附近是否有干扰。
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