主题:【求助】日立的f4500荧光分光光度计

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westyouday
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例如使用日立的f4500荧光分光光度计,测试固体样品,设定激发波长在254nm,在发射光谱中在510nm左右出现了一个不属于样品的尖锐的峰,不知道如何去除这个峰,因为样品的发射峰也在这个谱段,这个尖锐的峰在样品的两个发射峰之间。
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夕阳
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原文由 westyouday 发表:
例如使用日立的f4500荧光分光光度计,测试固体样品,设定激发波长在254nm,在发射光谱中在510nm左右出现了一个不属于样品的尖锐的峰,不知道如何去除这个峰,因为样品的发射峰也在这个谱段,这个尖锐的峰在样品的两个发射峰之间。

(1)510nm的峰是激发波长254nm的二级散射光谱,也称为"鬼峰";
(2)如果可以清楚的区分样品峰和鬼峰,并不影响测定一般可以不用除去鬼峰;
(3)如果坚持要除去鬼峰可以使用带通滤光片;
westyouday
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mengxianfeng
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我想问一下  你选择254NM激发波长是根据什么选的  我想测激发和发射光谱,里面有个EXWL 和EMWL不知道怎么确定,谢谢指教啊
westyouday
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根据测的荧光粉决定的。这两个值一般选择激发和发射光谱的峰值。如果应用于固定的激发源,则根据激发源的发射峰值来确定。
mengxianfeng
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你好  谢谢你的回答  由于是第一次接触  所以不是很懂  能否再给予充分说明一下  比如如何找最大激发和发射峰  谢谢啊
ignorance
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原文由 (mengxianfeng) 发表:
你好  谢谢你的回答  由于是第一次接触  所以不是很懂  能否再给予充分说明一下  比如如何找最大激发和发射峰  谢谢啊




一、点击“方法”图标。在打开的框图中,点击“一般” 图标,选择“波长扫描”方式;点击“仪器”图标,选择扫描方式为“发射”,固定激发波长为某一整数值X(我常设为300发射扫描开始波长为“X + 20nm,发射扫描结束波长为“2X20nm,但发射扫描结束波长最大不超过900nm

二、点击“测量”图标,开始进行发射光谱扫描。仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大发射波长及对应的荧光强度。

三、点击“方法”图标。在打开的框图中,点击“仪器”图标,选择扫描方式为“激发”,发射波长选择刚才所得的最大发射波长数值Y,激发扫描开始波长为“1/2Y + 20nm,激发扫描结束波长为“Y20nm

四、点击“测量”图标,开始进行激发光谱扫描。仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大激发波长及对应的荧光强度。

五、将激发波长设为“八、”确定的数值。重复“1、”至“4、”的步骤。直至获得的激发波长和发射波长的数值不再明显改变为止。
该帖子作者被版主 Pfz19852积分, 2经验,加分理由:积极应助!
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原文由 ignorance(ignorance) 发表:
原文由 (mengxianfeng) 发表:
你好  谢谢你的回答  由于是第一次接触  所以不是很懂  能否再给予充分说明一下  比如如何找最大激发和发射峰  谢谢啊




一、点击“方法”图标。在打开的框图中,点击“一般” 图标,选择“波长扫描”方式;点击“仪器”图标,选择扫描方式为“发射”,固定激发波长为某一整数值X(我常设为300发射扫描开始波长为“X + 20nm,发射扫描结束波长为“2X20nm,但发射扫描结束波长最大不超过900nm

二、点击“测量”图标,开始进行发射光谱扫描。仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大发射波长及对应的荧光强度。

三、点击“方法”图标。在打开的框图中,点击“仪器”图标,选择扫描方式为“激发”,发射波长选择刚才所得的最大发射波长数值Y,激发扫描开始波长为“1/2Y + 20nm,激发扫描结束波长为“Y20nm

四、点击“测量”图标,开始进行激发光谱扫描。仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大激发波长及对应的荧光强度。

五、将激发波长设为“八、”确定的数值。重复“1、”至“4、”的步骤。直至获得的激发波长和发射波长的数值不再明显改变为止。


你好,从回复看你很专业,我有几个问题可以向你请教吗?
1、为什么要这样测?可以介绍下吗?
2、如果溶剂是水的话,需要处理下吗?
3、改变激发波长,发射光谱不是形状不变,只是强度改变吗?可我的为什么强度形状都变化呢?
4、如果样品是悬浮液,如此反复测试,对结果应该有影响吧?又怎么处理?期待着你的回复!
谢谢!
teng1986
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论坛里有很多关于如何确定激发波长和发射波长的帖子,楼上的如果想知道可以看一下,虽然各仪器不同,但所用的原理都是一样的。改变发射波长最大发射波长的位置几乎不变(因为仪器自身原因可能会有一点变化)。如果变化很大,说明不是你要的荧光峰。悬浮液会加大散射的。可以把被测物质提取出来。
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