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主题：【求助】溶菌酶活力的测定？

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ahead35
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发表于：2008/01/22 14:44:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大哥、大姐：
谁有简易灵敏度高的方法请告知小弟，不甚感激！！！
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2008/1/22 22:06:29 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
哦,一般都用动力学做,比较麻烦,你有参考标准方法吗\
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2008/1/22 23:38:14 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大哥，我没有这方面的资料，不知大哥有标准测定资料不？谢谢！

原文由 zhouyuhu 发表:
哦,一般都用动力学做,比较麻烦,你有参考标准方法吗\
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2008/1/23 8:03:50 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ahead35 发表:
各位大哥、大姐：
谁有简易灵敏度高的方法请告知小弟，不甚感激！！！

和这里联系一下
http://www.guangdongdz.com/cjbd/147/1474800.html
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lzx3000
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2008/1/23 10:43:19 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ahead35 发表:
各位大哥、大姐：
谁有简易灵敏度高的方法请告知小弟，不甚感激！！！

我在做酪氨酸酶活力的测定，文献中报道的方法如下：测定波长475nm的吸光值随时间增长直线，从直线斜率求得酶活力，消光系数按E=3700mol-1L.cm-1计算。
但是我不明白通过吸光值对时间的直线斜率怎么求得酶活力？还有为什么要指定消光系数?计算过程中有什么作用？
希望得到高人的指点阿
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2008/1/24 8:36:06 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lzx3000 发表:
原文由 ahead35 发表:
各位大哥、大姐：
谁有简易灵敏度高的方法请告知小弟，不甚感激！！！

我在做酪氨酸酶活力的测定，文献中报道的方法如下：测定波长475nm的吸光值随时间增长直线，从直线斜率求得酶活力，消光系数按E=3700mol-1L.cm-1计算。
但是我不明白通过吸光值对时间的直线斜率怎么求得酶活力？还有为什么要指定消光系数?计算过程中有什么作用？
希望得到高人的指点阿

酶活力强的时候，吸光度随时间变化（升高）很快，当被抑制后，显著变慢直至停止变化，活性丧失。
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qplongsan
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2008/5/27 10:44:43 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以参考这个，国家卫生部标准http://www.newdruginfo.com/ypbz/hybb/r001.htm
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pchduan
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2008/5/27 20:30:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ahead35 发表:
各位大哥、大姐：
谁有简易灵敏度高的方法请告知小弟，不甚感激！！！

血清中溶菌酶活力通过浊度比色法测定。反应底物为用磷酸缓冲溶液(0.05M、pH为6.1)配制的0.2mg/ml微壁溶球菌(Sigma)悬液。100µl血清与1900µl菌悬液混合，在530nm波长下，分别在0.5min和4.5min测定吸光值(OD)。活力单位定义为溶菌酶每min使含菌酶液吸光值减少0.001所需的能力。需对照标准曲线。溶菌酶标准品溶于磷酸缓冲溶液(0.05M、pH为6.1)中，配置成浓度为0U/ml、100 U/ml、200 U/ml、400 U/ml、600 U/ml、800 U/ml的标准溶液，室温下测得吸光值。仅供参考！
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童话
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2008/6/2 16:32:10 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了，
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初学者&九点虎
zhouyuhu
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2008/6/2 21:24:52 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 pchduan 发表:
原文由 ahead35 发表:
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血清中溶菌酶活力通过浊度比色法测定。反应底物为用磷酸缓冲溶液(0.05M、pH为6.1)配制的0.2mg/ml微壁溶球菌(Sigma)悬液。100µl血清与1900µl菌悬液混合，在530nm波长下，分别在0.5min和4.5min测定吸光值(OD)。活力单位定义为溶菌酶每min使含菌酶液吸光值减少0.001所需的能力。需对照标准曲线。溶菌酶标准品溶于磷酸缓冲溶液(0.05M、pH为6.1)中，配置成浓度为0U/ml、100 U/ml、200 U/ml、400 U/ml、600 U/ml、800 U/ml的标准溶液，室温下测得吸光值。仅供参考！

说的很对,不过我觉得单点好象也能做,不知道楼住试验了吗
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