特定蛋白分析仪最基本工作原理是运用免疫比浊测定,其中影响免疫比浊测定的主要因素
1、抗原、抗体比例与浊度关系:抗原过量,出现“带现象”,IC分子小,且可发生再解离,浊度下降,光散射减少。抗体过量,IC形成随抗原量增加到抗原抗体最适比例时达高峰。抗体须过量但又必须适量,抗体浓度是测定关键。
2、抗体质量:特异性、效价、亲和力、R型抗体。高亲和性抗体的抗原结合点与抗原表位的空间构型上非常适合,两者结合牢固,不容易解离。反之,低亲和性抗体与抗原形成的复合物较易解离。
3、反应溶液:pH6.5~8.5,适当浓度电解质(中和抗原抗体复合物表面电荷,促进凝聚)、离子强度(大,IC形成快);一般常用磷酸盐缓冲液。
4、增浊剂:非离子型亲水剂如聚乙二醇(PEG)、吐温-20等,以PEG6000最好,浓度一般为3%~4%。浓度过高可致非特异沉淀。