主题:【求助】氨基柱分离对照品峰分叉的原因

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smallswallow9
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大家好!
我正在用氨基柱分离单糖,之前都好好的,就是分离度较叉。昨天突然发现所有对照品的峰都有了分叉。
开始我以为是因为我进的样品针是酸性的缘故,于是我用10倍柱体积的乙腈-0.5%的氨水(50-50)洗了柱子,然后用正常流动相洗了柱子。今天进对照品时发现还是老样子,没有改善。
有人说是柱头塌陷了,有这么严重么?还有没有其它原因啊?
请有心人帮帮忙啊!
一个新手碰到了这样的问题真的很急很担心啊!请帮帮忙!
谢谢!!!!
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〓猪哥哥〓
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restra009
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tanggangfeng
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原文由 smallswallow9 发表:
大家好!
我正在用氨基柱分离单糖,之前都好好的,就是分离度较叉。昨天突然发现所有对照品的峰都有了分叉。
开始我以为是因为我进的样品针是酸性的缘故,于是我用10倍柱体积的乙腈-0.5%的氨水(50-50)洗了柱子,然后用正常流动相洗了柱子。今天进对照品时发现还是老样子,没有改善。
有人说是柱头塌陷了,有这么严重么?还有没有其它原因啊?
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峰分叉,一般是进样量大, 二是保护柱有问题.三是分析柱有问题.
user007
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原文由 restra009 发表:
没做还原性糖吧?

难道是做还原性糖的缘故,为什么呢?
柏坡
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我的氨基柱到还没有这样的问题,不过进出的峰形有的时候确实很难看,陡的厉害。
柏坡
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氨基柱是以正相形式分离糖类物质的色谱柱,可以用极性很高的溶剂。它也可能代替普通正相色谱硅胶柱,并使用的非极性溶剂。

正相键合相色谱法
1. 氰基与氨基化学键合相
是正相键合色谱法较常用的固定相。流动相与以硅胶为固定相的吸附色谱法的流动相相似,也是烷烃(常用正已烷等)加适量极性调整剂而构成。氰基键合相的分离选择性与硅胶相似,但极性小于硅胶,即用相同的流动相及其它条件相同时,同一组分的保留时间将小于硅胶。许多需用硅胶柱分离的课题,可用氰基键合相柱完成。氨基键合相与硅胶的性质有较大差异,前者为碱性;后者为酸性。在作正相洗脱时,表现出不同的选择性。氨基键合相色谱柱是分析糖类最重要的色谱柱,也称为碳水化合物柱。
2. 分离机制
主要靠范德华作用力的定向作用力、诱导作用力或氢键作用力。例如,用氨基键合相分离极性化合物时,主要靠被分离组分的分子与键合相的氢键作用力的强弱差别而分离,如对糖类的分离等。若分离含有芳环等可诱导极化的非极性样品,则键合相与组分分子间的作用力,主要是诱导作用力。
3. 流动性的极性与容量因子的关系
在作正相洗脱时,流动相的极性增大,洗脱能力增加,K减小,t减小;反之k与t增大。分离结构相近的组分时,极性大的组分后出柱。
mike1990
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