实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8032540今日发帖：18 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
液质联用（LCMS）
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【已应助】【求助】链霉素回收率

浏览0 回复16 电梯直达
muziying114
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2010/06/11 14:08:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有做过链霉素含量测定的吗，我做了下，回收率不高。一种是往空白基质中加入标准品，提取、净化（过SPE柱），回收率有45%左右；另一种是空白基质经提取后，稀释标准品，再过SPE柱，回收率也只有50%左右。请赐教！
为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
netsking
netsking
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/11 22:56:57 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知道你用的什么SPE?如果是C18效果可能不会很好, 可以试一试离子树脂型的SPE.另外,不知道你用什么洗脱剂?
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
muziying114
muziying114
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/12 8:12:48 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
C18小柱， 阳离子交换都用过，C18小柱用的是100%的甲醇，阳离子交换柱用的是弱阳子的，强阳子的吸附太强，洗脱不下来，弱阳子交换小柱用到20%甲酸甲醇才能洗脱彻底，参考过文献，文献上用到10%甲酸甲醇！
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
xue2009
xue2009
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/12 11:38:18 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的第一种方法是加基质做的工作曲线，还是直接拿纯物质做的标准曲线？你做加标回收率算浓度的时候要用工作曲线，否则误差会很大，因为这里有提取步骤中损失的问题。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
netsking
netsking
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/12 22:54:46 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 muziying114(muziying114) 发表:
C18小柱， 阳离子交换都用过，C18小柱用的是100%的甲醇，阳离子交换柱用的是弱阳子的，强阳子的吸附太强，洗脱不下来，弱阳子交换小柱用到20%甲酸甲醇才能洗脱彻底，参考过文献，文献上用到10%甲酸甲醇！

C18用100%甲醇洗之前,用什么浓度的甲醇冲洗过吗?
阳离子交换柱用的是否用的是厂家提供的方法?俺做生物碱时, 用了NH4OH冲洗.不知道是不是对你有用?
另外SPE是哪家公司的, 试一试不同公司的. 有时效果会很不一样.
该帖子作者被版主 capinter加 3积分， 2经验，加分理由：感谢应助
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
muziying114
muziying114
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/13 11:28:34 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
你的第一种方法是加基质做的工作曲线，还是直接拿纯物质做的标准曲线？你做加标回收率算浓度的时候要用工作曲线，否则误差会很大，因为这里有提取步骤中损失的问题。


我用的是单点对照（添标处理后理论终浓度与对照品浓度一致），之前我做过线性考察，回收率低也在线性内的！
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
muziying114
muziying114
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/13 11:52:13 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 netsking(netsking) 发表:
原文由 muziying114(muziying114) 发表:
C18小柱， 阳离子交换都用过，C18小柱用的是100%的甲醇，阳离子交换柱用的是弱阳子的，强阳子的吸附太强，洗脱不下来，弱阳子交换小柱用到20%甲酸甲醇才能洗脱彻底，参考过文献，文献上用到10%甲酸甲醇！

C18用100%甲醇洗之前,用什么浓度的甲醇冲洗过吗?
阳离子交换柱用的是否用的是厂家提供的方法?俺做生物碱时, 用了NH4OH冲洗.不知道是不是对你有用?
另外SPE是哪家公司的, 试一试不同公司的. 有时效果会很不一样.


C18：活化－平衡－提取液上样（提取后pH值大约3.5）－10 ml水洗－100%甲醇洗脱（试过100%甲醇洗脱前有2%甲醇水溶液洗，回收更低，2%甲醇水溶液洗应洗掉部分链霉素）

用过艾杰尔的PCX（强阳离子交换柱），按厂家方法洗不下来；目前用Waters的WCX（弱阳离子交换柱），要求用5%甲酸甲醇溶液洗脱，结果没有回收，后来是增加了甲酸的浓度，即到了20%甲酸甲醇溶液才能洗脱彻底（洗脱5ml）。

不知您做的生物碱的pKa值是多少，waters资料说：碱性化合物pKa大于10时，选择用WCX柱（链霉素为11.7），PH7左右上样，5%氨水除杂，5%甲酸甲醇溶液洗脱；碱性化合物pKa在2至10之间，选择MCX柱（强阳离子交换柱），2%甲酸除杂，5%氨水甲醇溶液洗脱。
该帖子作者被版主 capinter加 5积分， 2经验，加分理由：积极响应
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
muziying114
muziying114
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/13 11:55:57 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
昨天又试了一下，标准品吹干复溶后回收率就只有70%左右，难道是标准品不稳定吗？我把吹干温度设在35度也这样，看看国标，用的都是50度，不知为何会这样呢？
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
hujiangtao
hujiangtao
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/15 23:03:11 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
四环素类是世界性难题
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
netsking
netsking
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/16 2:06:16 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
四环素类是世界性难题


搞清楚, 链霉素不是四环素类的.
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
duankehai
duankehai
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/6/18 8:55:09 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
链霉素检测看似简单，但是经手者大多头疼不已！
  你用C18固相萃取柱，如果我猜的不错，你过柱前肯定需要加入离子对试剂（除非你是用高浓度的具有离子对作用的试剂提取，比如三氯乙酸、三氟乙酸等）。链霉素的回收率低确实是个头疼的问题，但是，更头疼的是仪器对它好像也有记忆功能，如果你连续检测几个样品之后（即使浓度不很高），再进一针水样，可能同样有峰出现，特别是当流动相中有离子对试剂存在时，可能会更严重。
  解决回收率有个办法，我研究过，70%肯定没问题，就是用5%TCA提取，调节提取液PH=2,然后过HLB柱，10mL水淋洗，用10mL甲醇洗脱，65℃氮气吹干（一定要干），流动相溶解，检测。
  希望对你有帮助！
该帖子作者被版主 capinter加 5积分， 2经验，加分理由：感谢应助
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
猜你喜欢 最新推荐 热门推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁