快速导航采购仪器提醒

中药/天然药检测

版主:

入住本版

专家:

仪器信息网

居民列表

仪器社区 > 药物检测 > 中药/天然药检测帖子详情

快速回复发表新帖最新帖

主题：【原创】【第三届原创参赛】泽泻药材的含量测定研究

浏览0 回复23 电梯直达

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2010/12/10 19:39:22 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被土老冒豆豆设置为精华；

维权声明：本文为03yx2原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

中文摘要

目的：建立泽泻药材中药效成分含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定泽泻药材中泽泻醇B-23-乙酸脂的含量。结果：泽泻醇B-23-乙酸脂的平均回收率为99.47%，符合要求。泽泻中泽泻醇B-23-乙酸脂的含量不低于0.050%为宜。结论：本方法可作为泽泻定量控制的方法。

关键词：泽泻；泽泻醇B-23-乙酸脂；高效液相色谱法；含量测定

Abstract

Purpose: To establish the efficacy of herbal medicine ingredients Zexie determination. Method: Determination of Zexie ingredients in Zexie stupid B-23-acid lipid content. Results: Zexie alcohol B-23-acid lipid, the average recovery rate was 99.47 percent, to meet the requirements. Zexie Zexie alcohol in the B-23-acid fat content of not less than 0.050 percent suitable. Conclusion: This method can be used as Zexie quantitative control methods.

keywords：Rhizoma Alismatis Orientalitis;23 acetyl alisol B;HPLC;Determination.

0
赞贴
23
回帖
0
收藏
0
拍砖
版主
招募

为您推荐

近期热榜

热门活动

专属顾问快速对接

获取验证码

立即提交

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:40:05 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

泽泻为泽泻科植物泽泻 Alisma orientalis(Sam．)Juzep．的干茎。性味甘、寒,归肾、膀胱经。用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，高血脂^[1]。

泽泻所含的化学成分比较复杂，主要含三萜类，倍半萜类，二萜类等成分。泽泻醇 A(alisol A)及其乙酸酯、泽泻醇 B(Alisol B)及其乙酸酯、泽泻醇 C单乙酸酯(Alisol C 23-acetate)为首次从泽泻中分离得到的三萜类化合物。此后，各国学者又从不同产地、不同加工方法的泽泻饮片中分离得到了30多个三萜类化合物，其结构多为原萜烷型(Protostane)四环三萜。如24-乙酰泽泻醇A极其衍生物，23-乙酰泽泻醇B及其衍生物，乙酰泽泻醇E，泽泻醇F，泽泻醇H，泽泻醇G等。从生物途径归纳，三萜类都是由23-泽泻醇B衍生而来。泽泻倍半萜类成分主要是愈创木烷型，最早由Oshima从中分离到的是Alismo1和泽泻二醇(Alismoxide)。后又分离陆续出泽泻醇萜A，泽泻醇萜B，泽泻醇萜C，泽泻醇萜E，泽泻醇萜F等^[2]。泽泻还含有β-谷甾醇（β-sitosterol）、β-谷甾醇-6′-O-硬酸脂、硬脂酸、甘油醇-1-硬酸脂、三十烷^[3]、胆碱^[4]、植物凝聚素^[5]、泽泻多糖PH^[6]、PIIIF^[7]、生物碱，黄酮大黄素，淀粉，蛋白质，氨基酸，等成分^[8]。

现代泽泻药用有生泽泻、盐泽泻、麸炙泽泻三个主要品种。生泽泻：除去杂质，稍浸，润透，切厚片，干燥^[9]。盐泽泻：取泽泻片，加适量盐水拌匀闷透，置锅内，以文火加热、炒至微黄色时，取出放凉。每100kg泽泻用盐2kg^[10]。麸炙泽泻先将锅烧热，撒入麦麸待冒烟时，投入泽泻片不断翻炒。炒至药物呈黄色时取出，筛去麦麸放凉。每100kg泽泻用麦麸10～l5kg^[9]。樟帮麸炒泽泻：先将锅内烧热，撒入麸皮，待冒烟时，加入泽泻片，不断的翻动，炒至药物表面呈金黄色取出，筛去麸皮，放凉。每泽泻100公斤，用麦麸10公斤^[10]。泽泻性味甘，寒。归肾、膀胱经。具有利小便，清湿热的功能。用于小便不利，水肿涨满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，及高血脂等症。泽泻生品以利水渗湿为主，用于小便不利，水肿，泄泻、淋浊，湿热黄疸，湿热带下，痰饮等症。盐炙后能够引药下行，增强滋阴，泻热，利尿的作用，并利尿而不伤阴。用于小便淋涩，遗精淋漓，腰部重痛等症。麸炒后寒性缓和，以渗湿和脾，降浊以生清为主。用于脾湿泄泻，久泻等症^[11]。

泽泻药材等级的传统划分以块茎个头大小判断,而现代研究泽泻质量的忧劣多以药材中泽泻醇A24-乙酸脂,泽泻醇B23-乙酸脂的含量作为评价标准。

赞贴

拍砖

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:40:36 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一仪器与试药

（一）仪器

Agilent 1100 Series 高效液相色谱系统

Agilent 1100 色谱工作站

UV检测器

DAD检测器

Hypersil ODS C₁₈色谱柱（4.6mm×200mm 大连依利特公司）

KQ318T超声手饰清洗器（昆山超声仪器厂）

80-2离心机（深圳沙关角国华仪器厂）

分析天平（梅特勒公司）。

（二）试药

泽泻药材：所有药材均樟树天齐堂提供。

对照品：泽泻醇B-23-乙酸酯（对照品）

化学试剂：乙腈为色谱纯；甲醇（分析纯，色谱纯）；水为双蒸水。

二、实验方法与结果

（一）检测波长的选择

取一定浓度的泽泻醇B-23-乙酸酯甲醇溶液20μl注入高效液相色谱仪中。从所获得的二极管阵列检测图谱里，在200nm～400nm范围内选择对照品的最大吸收波长值，结果表明泽泻醇B-23-乙酸酯的最大吸收波长值在208 nm处。因此，选择测定波长为208 nm。见下图一，图二。

赞贴

拍砖

2010/12/10 19:41:47 Last edit by 03yx2

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:42:26 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

图一泽泻醇B23-乙酸脂3D效果图

图二 3D总体效果图

赞贴

拍砖

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:42:55 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

（二）色谱条件的建立

色谱柱：Hypersil ODS C₁₈柱（4.6mm×200mm，5μm）

流动相：乙腈﹕水=78﹕22

流速：1ml/min

检测波长：208 nm

柱温：25℃

在该色谱条件下，样品实现分离（R≥1.5，理论塔板数≥2500，对称因子在0.8～1.2之间）。

（三）供试液的制备研究

3.1提取溶剂的选择

取泽泻药材粉末（过80目筛）6份，每份约0.5g，精密称定，置离心试管中，其中3 份分别加入乙腈10ml，另三份分别加入甲醇10ml，浸渍15min，超声处理30min，离心10min（转速为3500r/min），分离上清液，剩余残渣如上法处理，分离上清液。合并上清液，置25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。吸取20μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果表明乙腈、甲醇提取效率相当，故选择甲醇为提取溶剂。结果见表3。

表3 不同溶剂对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯的提取能力比较

溶剂/含量（%）	甲醇	乙腈
1	0.2075	0.2064
2	0.2081	0.2079
3	0.2067	0.2092
平均值	0.2074	0.2078

赞贴

拍砖

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:43:46 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3.2提取方法的选择

取泽泻药材粉末（过80目筛）6份，每份约0.5g，精密称定，其中3份置离心试管中，加入甲醇10ml，按二.（三）.1项下操作。另三份分别置平底烧瓶中，各加入20ml甲醇，精密称重，回流法提取3小时，放冷，补足损失重量，滤过，吸取续滤液15 ml，转移至25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。吸取20μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果表明，超声提取法提取效果好。结果见表4。

表4 不同方法对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯的提取能力比较

方法/含量（%）	回流法	超声法
1	0.06215	0.2075
2	0.06374	0.2081
3	0.05948	0.2067
平均值	0.06179	0.2074

3.3提取时间的选择

取泽泻药材粉末（过80目筛）9份，每份约0.5g，精密称定，按二.（三）.1项下操作，其中3 份每次超声10min，3份每次超声20min，另外3份每次超声30min。吸取10μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果表明，超声提取20min和提取30min提取效果相当。但提取过程中考虑到超声发声器的位置，以使样品能均匀分散，提取时间选择30 min。结果见表5。

表5 超声时间对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯提取的影响

时间（min）/含量（%）	10	20	30
1	0.2065	0.2101	0.2075
2	0.2042	0.2056	0.2081
3	0.2077	0.2067	0.2067
平均值	0.2061	0.2075	0.2074

3.4提取次数的选择

取泽泻药材粉末（过80目筛）6份，每份约0.5g，精密称定，按二.（三）.1项下操作，其中3份超声提取一次，另外3份超声提取两次。吸取10μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果表明，提取两次较提取一次好。结果见表6。

表6 超声次数对药材中泽泻醇B-23-乙酸酯提取的影响

超声次数/含量（%）	超声1次	超声2次
1	0.2007	0.2075
2	0.2008	0.2081
3	0.2032	0.2067
平均值	0.2016	0.2074

3.5供试品的制备

取泽泻药材粉末（过80目筛）约0.5g，精密称定，加入甲醇10ml，浸渍15 min，超声处理30min，离心（3500r/min）10 min，分离上清液，于残渣中再加甲醇10ml，超声处理30min，离心（3500r/min），分离上清液。合并上清液，转移至25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。经0.45μm微孔滤膜滤过后，吸取10μl样品液进样。

赞贴

拍砖

2010/12/10 19:44:19 Last edit by 03yx2

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:45:20 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3.6含量测定方法学考察

3.6.1线性关系考察

精密称定泽泻醇B-23-乙酸酯对照品5.79mg，置50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取5ml、3ml、2ml、1ml、0.5ml、0.2ml，分别置10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得系列对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液10μl进样测定，记录峰面积，将测得的峰面积A对浓度C（mg/ml）进行线性回归，得回归方程为：

A=21447.37C+1.262 ；r=0.9999。见下图三。

实验表明，泽泻醇B-23-乙酸酯甲醇溶液在浓度为2.310～57.9μg/ml之间呈现良好的线性关系。

赞贴

拍砖

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:45:49 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3.6.2精密度实验

取同一浓度的泽泻对照品溶液（0.01158 mg/ml），连续进样6次，每次进样20μl检测，记录峰面积。结果见表7。

表7 精密度实验结果

进样序号	1	2	3	4	5	6
峰面积	249.0	248.7	251.7	247.7	249.4	250.5
RSD	1.209%

3.6.3重现性实验

取同一泽泻药材样品供试液10μl，连续六次注入高效液相色谱仪中，记录峰面积。结果表明，在制定的色谱条件下，分析方法具有良好的重现性。结果见表8。

表8 重现性试验结果

序号	保留时间	峰面积	RSD
1	8.972	424.3	2.882%
2	80972	426.2
3	8.972	430.5
4	8.969	434.9
5	8.958	424.0
6	8.967	416.7

3.6.4稳定性实验

取同一泽泻药材样品供试液10μl，分别在第0,2,4，6，8，10，12小时注入高效液相色谱仪中，记录峰面积。结果表明，在12小时内，样品具有良好的稳定性。结果见表9。

表9 稳定性实验结果

时间（h）	0	2	4	6	8	10	12
峰面积	424.3	430.5	424.0	427.5	420.3	430.5	425.9
RSD	3.697%

3.6.5加样回收率实验

分别取同一泽泻药材粉末（过80目筛）6份，每份约0.5g，精密称定。另取泽泻醇B-23-乙酸酯对照品6.17mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别吸取0.25ml，0.5ml，0.75ml，1ml，1.25ml对照品溶液，分别加入到5 份上述称取的药材粉末中，剩余一份作空白对照。按泽泻供试品制备方法操作，并计算加样回收率，结果见表10。

表10 加样回收率实验结果

样品重（g）	加入量（mg）	测得量（mg）	回收率（%）	RSD
0.5004	/	0.2079	/	3.372%
0.5000	0.7713	0.9534	96.65%
0.4999	0.6170	0.8512	104.27%
0.5007	0.4628	0.6836	102.78%
0.5002	0.3085	0.5085	97.45%
0.4997	0.1543	0.3563	96.18%

赞贴

拍砖

〓猪哥哥〓

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/12/10 19:47:32 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

（四）样品的含量测定

取樟树天齐堂提供的泽泻样品10批，每份约0.5g，精密称定。按样品制备方法制得样品供试液，分别吸取10μl样品液进样，记录峰面积，计算含量。结果见表11。

表11 汇仁集团GAP基地的泽泻样品含量测定结果（n=2）

样品批次	含量(g/g)	X
1	0.07737%	0．08319%
2	0.08622%
3	0.06728%
4	0.09423%
5	0.09079%
6	0.07990%
7	0.08252%
8	0.08306%
9	0.08951%
10	0.08100%

三、小结与讨论
3.1色谱行为

在本实验条件下，泽泻样品中的泽泻醇B-23-乙酸酯能得到较好的分离，泽泻醇B-23-乙酸酯的出峰保留时间在8.9min左右，与泽泻醇B-23-乙酸酯对照品的出峰时间一致。

其图谱参数：分离度＞1.5；对称因子=0.936；理论塔板数=12047。

3.2建立了用HPLC紫外检测法测定泽泻样品含量的方法，确定了色谱条件：色谱柱：Hypersil ODS C₁₈柱（4.6mm×200mm，5μm）；流动相：乙腈—水=72：28；流速：1ml/min；检测波长：208 nm；柱温：25℃；外标法定量。

3.3确定了泽泻样品制备的方法：选用超声提取方法，以甲醇为提取溶剂，提取两次，每次30min。

3.4含量测定方法的方法学考察。得线性方程A=21447.37C+1.262 ；r=0.9999；精密度为1.209%；重现性为2.882%；稳定性为3.697%；加样回收率为3.372%。

3.5测定了10批汇仁集团GAP基地提供的泽泻样品的含量，测得其平均含量为0.08319%±0.007687%；川泽泻的平均含量为0.2391%±0.6493%；建泽泻的平均含量为0.09460%±0.000615%。

3.6考察不同提取溶剂对泽泻样品含量测定的影响时，发现甲醇与乙腈的提取效率相当，但考虑到甲醇较之乙腈毒性小，更为经济，故选用甲醇。

3.7考察不同的超声时间对泽泻样品的含量测定的影响时，结果表明超声提取20min、30min 比之超声提取10min提取得更完全，而提取20min和提取30min则效果相当。

赞贴

拍砖

2010/12/10 19:48:56 Last edit by 03yx2