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主题：【原创】【第三届原创参赛】HPLC法同时测定通宣中黄芩苷和橙皮苷的含量研究

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发表于：2010/12/23 15:29:19 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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冷冷的冰雨

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2010/12/23 15:39:28 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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2010/12/23 15:48:04 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

好的,马上给贴出来!!

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2010/12/23 15:49:53 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
怎么没贴出来？

高效液相色谱法同时测定通宣理肺颗粒中黄芩苷、橙皮苷含量方法学研究

关键词：通宣理肺颗粒；黄芩苷；橙皮苷；HPLC。

摘要：目的：建立高效液相色法测定通宣理肺颗粒（黄芩、陈皮）中黄芩苷、橙皮苷含量测定方法。

通宣理肺颗粒具有解表散寒、宣肺止嗽的功效，临床用于风寒束表、肺气不宣所致的感冒咳嗽，症见发热、恶寒、咳嗽、鼻塞流涕、头痛、无汗、肢体酸痛。是国家基本药物目录里的常用药，因此寻找一个合适的方法测评本药物中多种成分是控制本产品质量的关键。处方中黄芩、陈皮药材均为用量较大。通宣理肺颗粒的制法是将除紫苏叶药材的其余药材用水煎煮浓缩后，制成的颗粒。标准与《中国药典》一部中的通宣理肺丸有相似之处，但一部中测定采用HPLC法测定盐酸麻黄碱，处理方法比较复杂，处理过程中损耗大回收率低。而且测评的成分只有麻黄药材中的成分，与一测多评的检测方法原则不相符。本实验采用HPLC法同时测定黄芩苷、陈皮苷含量，用以作为质量控制方法，方法简便、快速，重现性、稳定性及回收率均较好。研究同时测定通宣理肺颗粒中黄芩苷和橙皮苷的准确测定含量的方法。方法：采用高效液相色谱法同时测定通宣理肺颗粒制剂中黄芩苷和橙皮苷的含量。结果：黄芩苷在8.03 -40.14ug/ml，橙皮苷在6.046-30.23 ug/ml范围内呈良好的线性关系。黄芩苷平均回收率99.2%，RSD＝2.4%，橙皮苷平均回收率99.3%,RSD=2.3%。结论：本方法专属性强，定量方法简便、准确、可靠，可用于通宣理肺颗粒的质量控制。

1仪器与试药

1.1 仪器：安捷伦1200高效液相色谱、赛多利斯CP225D十万分之一电子天平、华南超声波清洗机、水浴锅。

1.2 试药：对照品由中国药品生物制品检定所提供，黄芩苷批号：110715-20815 (含量95.2%)；橙皮苷批号：110721-200512。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为去离子水经蒸馏所得。

2 试验方法与结果

2.1色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.2%磷酸溶液（20：80）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。

2.2对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品10.55mg、橙皮苷对照品7.56，分别25ml量瓶中，加甲醇适量溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。含黄芩苷0.4017mg/ml、含橙皮苷

0.3024mg/ml的对照贮备溶液。再精量取对照贮备液5ml，置50ml量瓶中，即得含黄芩苷40.14ug/ml、含橙皮苷30.24ug/ml的对照溶液。

2.3系统适应性取对照溶液和供试品溶液，各10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，结果黄芩苷和橙皮苷与其它成分均达到基线分离，见图1，图2。

图1 对照

2.4供试品溶液的制备：取本品颗粒5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1.5放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

图2 供试品溶液

2.5阴性样品的制备：按供试品溶液制备时的取样量，折算成除黄芩、陈皮外，处方中其余药材的取样量，按制备工艺制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液即得。

阴性

2.6测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，以峰面积计算含量。

2.7线性范围考察精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10，注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。得回归方程Y=-1.779e+004+1.518e+004X，r=0.999754

黄芩苷标准曲线测定结果（n=5）

进样量(ug)	8.03	16.06	24.09	32.12	40.15
平均峰面积	128880	255303	381727	515168	636077

黄芩苷标准曲线

以上结果表明：黄芩苷进样量在8.03－40.1ng范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程及相关系数为：Y=15869x+1153.3,r=0.9998 (X为黄芩苷进样量，单位μl，Y为峰面积)。

橙皮苷标准曲线测定结果（n=5）

进样量(ng)	6.046	12.092	18.138	24.184	30.23
平均峰面积	121162	242668	363870	485412	606596

橙皮苷标准曲线图

以上结果表明：橙皮苷进样量在6.05－30.23ng范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程及相关系数。为：Y=20073x-142，r=1.00000 (X为橙皮苷进样量，单位μl，Y为峰面积)。

2.6 精密度试验吸取对照品溶液10μl，在上述色谱条件下连续进样5针，测得峰面积，结果对照品黄芩苷的RSD为0.34%,对照品橙皮苷的RSD为1.2%,表明仪器精密度良好。

精密度试验结果

	1	2	3	4	5	平均值	RSD(%)
黄芩苷对照品溶液	634255	630013	631548	630518	628564	630980	0.34
橙皮苷对照品溶液	603298	618054	617862	610015	616527	613151	1.0

2.6 稳定性试验吸取供试品溶液10μl，于0、1、2、4、6、8、16、32h进样，测定峰面积，结果供试品中黄芩苷的RSD为0.27%、橙皮苷的RSD为0.4%，说明样品在测定时间内黄芩苷和橙皮苷性质均稳定。

稳定性考察结果

放置时间(h)	0	1	2	4	6	8	16	32	RSD（%）
黄芩苷溶液峰面积	845188	846214	844207	849032	843654	844622	846017	850178	0.3
橙皮苷溶液峰面积	947805	949672	948577	946683	958231	943876	948715	946528	0.4

2.7 重复性试验取同一样品5份，按供试品液的制备方法制备，依法测定，RSD为1.42%，说明该方法重现性良好。

黄芩苷重现性试验结果

编号	1	2	3	4	5	6
取样量(g)	5.1038	5.0138	5.0104	4.9567	5.0088	5.1177
峰面积	845188	842617	836218	830387	831125	843186
含量(mg/g)	5.27	5.35	5.31	5.33	5.28	5.24
平均值(mg/g)	5.30
RSD(％)	0.84

橙皮苷重现性试验结果

编号	1	2	3	4	5	6
取样量(g)	5.1038	5.0138	5.0104	4.9567	5.0088	5.1177
峰面积	938564	941266	918804	903157	933152	940062
含量(mg/g)	4.53	4.62	4.52	4.49	4.59	4.53
平均值(mg/g)	4.55
RSD(％)	1.2

2.8 加样回收试验取已知含量的样品约0.2g，共6份，精密称定，其中一份不加黄芩苷对照品作为随行对照，其余5份分别精密加入黄芩苷对照品，按供试品的制备方法处理后进样10μl，依法测定，计算回收率，结果见表1

表1

实测黄芩苷含量－样品中黄芩苷含量

回收率（％）= ×100%

黄芩苷对照品加入量

黄芩苷回收率测定结果

编号	取样量（g）	样品中的含量（mg/g）	测出总量（mg）	加入量（mg）	回收率（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
1	4.5082	5.30	25.88	2.0085	99.07
2	4.5118	5.30	25.84	2.0085	96.10
3	4.5346	5.30	25.94	2.0085	95.10
4	4.5042	5.30	25.91	2.0085	102.91
5	4.5237	5.30	25.96	2.0085	98.58	99.2	2.4
6	4.5074	5.30	25.92	2.0085	101.07

橙皮苷回收率测定结果

编号	取样量（g）	样品中的含量（mg/g）	测出总量（mg）	加入量（mg）	回收率（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
1	4.5082	4.55	23.48	3.024	98.21
2	4.5118	4.55	23.56	3.024	100.20
3	4.5346	4.55	23.71	3.024	101.85
4	4.5042	4.55	23.46	3.024	98.21
5	4.5237	4.55	23.64	3.024	101.19	99.3	2.1
6	4.5074	4.55	23.42	3.024	96.23

3讨论：

3.1通宣理肺颗粒中药味众多，其中的成分复杂，成分间的性质差异也比较大，为了使各成分达到良好的分离效果，在方法建立过程中，主要对流动相组成及色谱柱进行了筛选。我们以甲醇、乙腈、0.2%磷酸溶液、0.1%醋酸溶液以及水等进行了不同组合的筛选。结果以乙腈-0.2%磷酸溶液（20：80）可使样品的黄芩苷和橙皮苷达到基线分离，效果最好。因此最终确定该流动相。

3.2基于不同成分紫外吸收特征的不同，为了提高检测灵敏度，在定量时我们采用了物质的最大吸收波长或与之相接近的波长作为检测波长。

3.3色谱柱的选择；考虑到不同厂家色谱柱对分离效果，我们选择了依利特Hypersil ODS2(4.6*250mm,5um)；安捷伦ZORBAX SB-C18(4.6*250mm,5um)；菲萝门C18(4.6*250mm,5um)，结果分离效果均较好。综合价格及耐用性等因素，本实验选用菲萝门C18柱。

参考文献：《中国药典》-部

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2010/12/23 16:06:39 Last edit by xyhdcm2002