氟哌酸(又名诺氟沙星)检测
摘要
广谱抗生素。无臭,味微苦;在空气中能吸收水分,遇光色渐变深。本品在二甲基甲酰胺中略溶,在水或乙醇中极微溶解,在醋酸、盐酸或氢氧化钠溶液中易溶。本品的熔点为218~224℃。本品为胶囊剂,内容物为白色至淡黄色粉末。
药理毒理
本品为氟喹诺酮类抗菌药,具广谱抗菌作用,尤其对需氧革兰阴性杆菌的抗菌活性高,对下列细菌在体外具良好抗菌作用:肠杆菌科的大部分细菌,包括枸椽酸杆菌属、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌等肠杆菌属、大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形菌属、沙门菌属、志贺菌属、弧菌属、耶尔森菌等。对多重耐药菌亦具抗菌活性。对青霉素耐药的淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌亦有良好抗菌作用。诺氟沙星为杀菌剂,通过作用于细菌DNA螺旋酶的A亚单位,抑制DNA的合成和复制而导致细菌死亡。
实验分析
方法名称
高效液相色谱法测定氟哌酸的含量。
方法原理 将待测品溶液注入高效液相色谱仪,利用C18色谱柱进行色谱分离,采用紫外吸收检测器于278nm波长处进行检测。参照标准品谱图保留时间定性,外标法定量计算诺氟哌酸含量。
试剂
1.0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.0)
2.乙腈(色谱纯)
3.三乙胺溶液
4. 0.1mol/L盐酸溶液
5.超纯水或二次蒸馏水
仪器及设备
1.高效液相色谱仪(紫外检测器)
2.超声波
3.溶剂过滤器装置
4.针筒式过滤器
5.振荡仪
6.100ul微量进样器
色谱条件
色谱柱:Venusil ASB C18 色谱柱(4.6×250mm,5μm)
S/N:S9520525B10050
流动相:0.025mol/L磷酸溶液:乙腈=87%:13%(V:V)
流速:1.0ml/min
检测波长:280nm
进样量:20ul(手动进样,20ul定量环)
柱温:室温
试样制备
1. 标准品溶液的制备
精密称取标准品适量,加流动相溶液溶解并配制成每mL含25μg的溶液,即25μg/ml,振荡仪摇匀,微膜过滤,备用。
2.样品溶液的制备
精密称取本品0.2g,置100mL容量瓶中,并加入0.1mol/L盐酸溶液20mL使溶解后,加超纯水或二次蒸馏水稀释至刻度,振荡仪摇匀,精密量取1mL,置10mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,振荡仪摇匀,微膜过滤,备用。
测试操作步骤
按以上色谱条件,依次精密吸取上述标准品溶液与样品溶液各60μL注入高效液相色谱仪,通过外标法计算出氟哌酸含量。
标准品色谱图如下:
最小检出限测试:
按以上色谱条件进0.25μg/ml标准品溶液,计算得最小检出限0.01μg/ml.
色谱图如下:
精确度测试:
按以上色谱条件对同一样品连续进样6次,精确度误差定性RSD=0 38%,定量RSD=0.63%。
测试图谱如下:
准确度测试:
分别配制浓度0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml的标准品溶液,待仪器稳定后,按以上色谱条件,依次进样,并计算,得标准曲线方程:Y = 4.0924 e - 0.005 * X + 1.3686,相关系数:R=0.9998。
标准曲线图如下:
样品的测定:
按以上色谱条件进样品溶液,色谱图如下:
结论
利用此方法检测氟哌酸具有准确、可靠,检出限低,峰形好,出峰快,前处理简单等优点。本方法适合氟哌酸含量的检测。