快速导航采购仪器提醒

厂商论坛

版主:

入住本版

专家:

仪器信息网

居民列表

仪器社区 > 特色服务 > 厂商论坛帖子详情

快速回复发表新帖最新帖

主题：【原创】宝刀未老，游刃有余，阿莫西林双氯西林钠胶囊含量测定方法学部分

浏览0 回复30 电梯直达

东风恶

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2013/06/19 08:40:17 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被xue2009设置为精华；

前言：这是一个老项目了，对于公开品名，是已经上报了，宝刀系列均是以前的资料，写出来和大家共享一下。

由于网络问题，有些图看不到了，我在附件上显示了。建议大家看附件好了，看这个很吃力。望谅解。

项目：含量测定（3.2.P.5.2.9）

检查方法：照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ D）测定

试验条件：

仪器：LC-10AT VP(SHIMADZU) SPD-10A VP(SHIMADZU)

万分之一电子天平（Sartorius ABS-124S型）

工作站（LCsolutionlite色谱工作站)

色谱柱（welchrom 填料：C₁₈，规格：250mm×4.6mm，填料粒径：5μm；pn：wel518425，sn：w10212097）

UV检测器（检测波长：225nm）

柱温：室温

流动相：流动相A为0.1mol/L磷酸二氢钾溶液-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275:275:200:250），用磷酸调节pH值至2.0；流动相B为乙腈。按下表进行线性梯度洗脱：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
7	90	10
11	90	10

流速：1.2ml/min

运行时间：约11分钟

系统适用性：理论板数按阿莫西林峰和双氯西林峰计算应均不低于2000，双氯西林与阿莫西林的分离度应符合规定。

具体试验操作：

取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于阿莫西林25mg，双氯西林12.5mg)，置100ml棕色量瓶中，加磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（550:200:250）并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿莫西林和双氯西林对照品，精密称定，加磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（550:200:250）溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿莫西林0.25mg和双氯西林0.125mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积分别计算出供试品中C₁₆H₁₉N₃O₅S和C₁₉H₁₇Cl₂N₃O₅S的含量。

计算公式：

标示量百分含量（%）=××100%

式中：C_s为对照品的浓度（mg/ml）；

A_t为供试液的主峰面积；

N_t为供试液的稀释倍数；

A_S为对照品溶液的主峰面积；

W为供试品取样量（mg）。

3.2.P.5.3.6 含量测定

色谱图见附件1367～1442

含量测定方法学验证结果概要

项目	验证结果
波长选择	参照有关物质项下，波长选定为225nm
流动相选择	参照有关物质项流动相组分，流速为1.2ml/min
进样精密度试验	连续测量6次，主峰保留时间和峰面积RSD值均小于2.0%
线性关系试验	阿莫西林的浓度在154.3μg/ml～360.1g/ml，直线方程为y=53931x+117907，R2=0.9995，相关系数r=0.9997，截距为117907，小于100%浓度溶液阿莫西林峰面积的±2.0%（282392），表明线性关系试验符合要求；双氯西林钠的浓度在79.1μg/ml～184.5g/ml，直线方程为y=85091x+684344，R²=0.9990，相关系数r=0.9995，截距为684344。
溶液稳定性试验	室温条件下置8个小时，测得阿莫西林和双氯西林钠的主峰面积的RSD%值均小于2.0%
回收率试验	阿莫西林平均回收率为101.3%，在98.0%～102.0%范围内，n=9，RSD为0.67%，小于2.0%，回收率符合含量测定方法验证要求。双氯西林钠平均回收率为100.6%，在98.0%～102.0%范围内，n=9，RSD为1.38%，小于2.0%，回收率符合含量测定方法验证要求。
重复性试验	试验结果为99.02%～102.17%，RSD%值均小于2.0%，符合重复性试验要求
含量测定结果	上市品和自制品均符合规定

3.2.P.5.3.6.1波长选择

本品含量测定检测波长参照有关物质检查波长，即225nm。

3.2.P.5.3.6.2流动相选择(色谱图见附件1060～1075)

本品含量测定项下流动相组分参照有关物质检查项下流动相，为缩短分析时间，调整梯度洗脱条件。通过流动相A等度洗脱，其双氯西林钠出峰时间较晚（约20min），逐步加入流动相B（乙腈）来调整，然后再调节流速达到适当的分析时间，当流动相B（乙腈）比例增大有利于双氯西林钠主峰的理论板数，当流速增加到1.5ml/min时，色谱柱压力增加到17Mpa。

综合以上因素选定流动相条件为：以流动相A为0.1mol/L磷酸二氢钾溶液-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275:275:200:250），用磷酸调节pH值至2.0；流动相B为乙腈；流速为每分钟1.2ml；检测波长为225nm。以下表进行线性梯度洗脱。理论板数按阿莫西林峰和双氯西林峰计算应均不低于2000，双氯西林与阿莫西林的分离度应符合规定。

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
7	90	10
11	90	10

试验过程：

供试液：精密称取本品（规格：0.375g，批号：20110101）0.0431g，置100ml量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。

①以流动相A进行等度洗脱，流速为1.0ml/min，精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，典型色谱图见下图(色谱图见附件1060)：

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	1.527	0.00000	32655	0.1088	1.784	--	1064.449
2	4.379	0.00000	60908	0.2030	1.344	11.664	3370.822
3	6.648	0.00000	16679096	55.5970	1.011	6.348	4138.199
4	8.447	0.00000	53214	0.1774	0.838	3.540	3138.427
5	13.147	0.00000	30827	0.1028	0.747	6.976	4993.018
6	15.711	0.00000	65280	0.2176	0.947	2.765	3200.106
7	20.718	0.00000	13077997	43.5934	0.936	4.365	4907.052

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于4000。

②以流动相A、B进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，梯度洗脱方式和典型色谱图见下表图(色谱图见附件1061)：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
6	90	10
15	90	10

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	1.459	0.00000	56751	0.1852	1.083	--	569.474
2	1.846	0.00000	64775	0.2114	1.793	1.740	1358.467
3	2.222	0.00000	7530	0.0246	--	1.442	765.105
4	2.362	0.00000	32845	0.1072	--	0.512	1749.452
5	2.962	0.00000	50698	0.1654	1.144	2.745	3140.381
6	3.788	0.00000	16353808	53.3652	1.103	3.547	3551.516
7	4.292	0.00000	2570	0.0084	1.375	2.158	6489.602
8	4.596	0.00000	11024	0.0360	1.106	1.356	6071.005
9	5.605	0.00000	262795	0.8575	0.722	2.864	2291.990
10	6.629	0.00000	15761	0.0514	0.804	2.711	8523.512
11	6.993	0.00000	69584	0.2271	1.034	1.109	5737.622
12	7.605	0.00000	21020	0.0686	0.916	1.847	10809.034
13	8.152	0.00000	21792	0.0711	0.824	1.376	4191.092
14	10.215	0.00000	13492960	44.0298	0.958	4.257	7715.397
15	11.147	0.00000	131177	0.4281	0.959	1.930	7927.547
16	11.793	0.00000	32746	0.1069	1.081	1.286	8767.838
17	12.428	0.00000	8921	0.0291	1.040	1.336	12356.013
18	13.014	0.00000	8309	0.0271	1.161	1.168	8749.285

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于3000，双氯西林钠主峰理论板数达到7000。

③以流动相A、B进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，梯度洗脱方式和典型色谱图见下表图(色谱图见附件1062)：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	5
5	85	15
6	90	5
15	90	5

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	1.963	0.00000	71698	0.2403	1.143	--	1381.826
2	2.731	0.00000	22631	0.0759	1.189	3.710	2904.008
3	3.443	0.00000	54394	0.1823	0.898	3.242	3394.891
4	4.753	0.00000	16353295	54.8183	1.068	4.861	3944.750
5	5.142	0.00000	35224	0.1181	1.837	1.413	6920.616
6	7.427	0.00000	31653	0.1061	0.884	8.457	10275.546
7	8.144	0.00000	227994	0.7643	0.747	1.870	4717.508
8	8.847	0.00000	121630	0.4077	0.779	1.656	8906.010
9	9.270	0.00000	38235	0.1282	3.251	0.658	1655.368
10	12.157	0.00000	12875049	43.1588	0.956	3.190	2932.138

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于2000，双氯西林钠主峰理论板数下降至2900，乙腈的比例直接影响到双氯西林钠的理论板数。

④以流动相A、B进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min，精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，梯度洗脱方式和典型色谱图见下表图(色谱图见附件1063)：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	5
5	85	15
6	90	5
15	90	5

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	1.654	0.00000	66056	0.2658	1.103	--	1100.578
2	2.295	0.00000	20069	0.0808	1.158	3.375	2586.084
3	2.917	0.00000	45432	0.1828	0.857	3.191	3094.039
4	4.034	0.00000	13553808	54.5481	1.060	4.648	3551.711
5	4.399	0.00000	140841	0.5668	--	1.051	1737.970
6	6.281	0.00000	28612	0.1152	0.964	5.383	8201.704
7	7.046	0.00000	207751	0.8361	0.720	2.185	4446.737
8	7.640	0.00000	77019	0.3100	1.021	1.622	9703.165
9	9.811	0.00000	10535378	42.4003	1.023	4.341	3234.582
10	12.582	0.00000	172467	0.6941	0.915	3.372	2783.828

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于3000，流速增加至1.2ml/min，两主峰保留时间有所提前。

⑤以流动相A、B进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min，精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，梯度洗脱方式和典型色谱图见下表图(色谱图见附件1064)：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
6	90	10
15	90	10

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	1.535	0.00000	74235	0.2803	1.633	--	1277.766
2	1.966	0.00000	33932	0.1281	--	2.272	1440.322
3	2.463	0.00000	42410	0.1601	1.135	2.535	2851.813
4	3.146	0.00000	13691792	51.6941	1.097	3.363	3219.236
5	3.832	0.00000	24103	0.0910	1.058	3.140	5061.970
6	4.645	0.00000	315595	1.1915	0.790	2.786	2549.413
7	5.540	0.00000	38306	0.1446	0.854	2.846	7190.080
8	5.864	0.00000	81436	0.3075	1.077	1.118	5433.266
9	6.847	0.00000	55119	0.2081	0.858	2.433	3132.324
10	8.644	0.00000	10751027	40.5911	0.965	3.937	6655.264
11	9.515	0.00000	175822	0.6638	0.995	1.839	5285.921
12	10.268	0.00000	73123	0.2761	1.041	1.340	4690.931
13	15.921	0.00000	66541	0.2512	0.680	6.522	3155.731
14	18.278	0.00000	1062743	4.0124	1.917	1.162	624.839

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于3000，流速增加至1.2ml/min以及乙腈比例增加，两主峰保留时间有所提前，双氯西林钠主峰理论板数增加至6000以上。

⑥以流动相A、B进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min，精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，梯度洗脱方式和典型色谱图见下表图(色谱图见附件1065)：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
6	90	10
12	90	10

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	1.212	0.00000	65163	0.2553	0.893	--	476.924
2	1.544	0.00000	84040	0.3292	1.556	1.668	1241.130
3	1.974	0.00000	35690	0.1398	--	2.233	1407.655
4	2.471	0.00000	46103	0.1806	1.116	2.493	2773.460
5	3.160	0.00000	13745616	53.8510	1.099	3.362	3226.914
6	3.838	0.00000	29088	0.1140	1.048	3.063	4877.921
7	4.698	0.00000	344543	1.3498	0.775	2.936	2633.628
8	5.539	0.00000	50749	0.1988	0.872	2.647	6769.839
9	5.887	0.00000	105164	0.4120	1.062	1.156	4986.538
10	6.878	0.00000	73013	0.2860	0.840	2.356	2940.947
11	8.654	0.00000	10647600	41.7140	0.964	3.811	6640.418
12	9.528	0.00000	189786	0.7435	0.998	1.840	5265.736
13	10.281	0.00000	86236	0.3378	1.040	1.333	4611.522
14	11.015	0.00000	22462	0.0880	1.076	1.262	6225.514

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于3000，流速增加至1.2ml/min以及乙腈比例增加，两主峰保留时间有所提前，双氯西林钠主峰理论板数增加至6000以上，梯度运行至12min基线平稳。

⑦以流动相A、B进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min，精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，梯度洗脱方式和典型色谱图见下表图(色谱图见附件1066～1072)：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
7	90	10
12	90	10

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	0.357	0.00000	24153	0.0948	1.245	--	3.366
2	1.216	0.00000	59810	0.2346	1.125	1.736	531.570
3	1.545	0.00000	85015	0.3335	1.502	1.715	1267.735
4	1.981	0.00000	39243	0.1539	--	2.225	1325.908
5	2.460	0.00000	106446	0.4176	--	2.105	1710.607
6	3.132	0.00000	13767653	54.0105	1.099	2.927	3205.622
7	3.843	0.00000	28933	0.1135	1.103	3.263	5136.312
8	4.601	0.00000	323063	1.2674	0.867	2.680	2745.529
9	5.555	0.00000	53699	0.2107	0.885	3.095	7020.235
10	5.868	0.00000	79747	0.3128	1.122	1.101	6021.822
11	6.814	0.00000	66373	0.2604	0.890	2.443	3334.338
12	8.678	0.00000	10544441	41.3658	0.963	4.152	6637.561
13	9.527	0.00000	197288	0.7740	0.988	1.788	5303.372
14	10.255	0.00000	90469	0.3549	1.072	1.294	4640.592
15	11.007	0.00000	24384	0.0957	1.085	1.288	6086.682

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于3000，流速增加至1.2ml/min以及乙腈比例增加，两主峰保留时间有所提前，双氯西林钠主峰理论板数增加至6000以上，梯度运行至12min基线平稳。

⑧以流动相A、B进行梯度洗脱，流速为1.5ml/min。

供试液-2：精密称取本品（规格：0.375g，批号：20110101）0.0447g，置10ml量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液-2，精密量取20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图(色谱图见附件1073)；

精密量取20μl供试液注入高效液相色谱仪，记录色谱图(色谱图见附件1074～1075)。

梯度洗脱方式和典型色谱图见下表图(色谱图见附件1073～1075)：

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
7	90	10
12	90	10

供试液-2典型色谱图：

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	0.581	0.00000	38286	0.0226	0.805	--	9.917
2	0.988	0.00000	74946	0.0442	1.696	0.830	270.960
3	1.487	0.00000	773082	0.4564	0.776	2.626	1795.658
4	1.965	0.00000	555965	0.3282	--	2.899	1726.814
5	2.542	0.00000	84265404	49.7428	0.860	2.779	2020.394
6	3.114	0.00000	82014	0.0484	--	2.755	4320.435
7	3.724	0.00000	3929502	2.3196	0.906	2.277	1850.921
8	4.530	0.00000	217118	0.1282	--	1.867	1228.697
9	4.799	0.00000	377030	0.2226	--	0.479	1007.064
10	5.236	0.00000	166356	0.0982	--	0.939	4112.661
11	5.538	0.00000	641704	0.3788	--	0.853	3348.896
12	6.278	0.00000	62892	0.0371	0.845	1.778	3121.250
13	7.190	0.00000	76883552	45.3853	0.970	2.175	5473.031
14	7.863	0.00000	1240644	0.7324	0.992	1.695	6022.781
15	8.378	0.00000	24514	0.0145	1.133	1.356	8930.174
16	8.858	0.00000	39248	0.0232	1.334	1.110	4817.893
17	9.483	0.00000	29794	0.0176	1.431	1.287	6771.330

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于2000，流速增加至1.5ml/min以及乙腈比例增加，两主峰保留时间有所提前，双氯西林钠主峰理论板数增加至6000以上，梯度运行至12min基线平稳，由于供试液-2浓度较大，阿莫西林主峰出现平头峰。

供试液典型图谱：

峰#	保留时间	浓度	面积	面积%	拖尾因子	分离度	理论塔板#
1	1.231	0.00000	76271	0.3941	1.499	--	1085.221
2	1.491	0.00000	21444	0.1108	--	1.260	514.264
3	1.593	0.00000	29310	0.1514	--	0.387	586.781
4	1.973	0.00000	34767	0.1796	1.209	1.785	2337.839
5	2.529	0.00000	10639693	54.9718	1.102	3.095	2671.539
6	3.115	0.00000	54780	0.2830	1.037	2.990	4023.005
7	3.751	0.00000	501931	2.5933	0.915	2.248	1651.116
8	4.519	0.00000	113110	0.5844	0.916	2.482	5225.541
9	4.819	0.00000	92677	0.4788	1.153	1.144	4961.773
10	5.631	0.00000	129885	0.6711	0.895	2.263	2574.263
11	7.200	0.00000	7213868	37.2717	0.960	3.820	5815.185
12	7.863	0.00000	246286	1.2725	0.933	1.731	6572.042
13	8.353	0.00000	160155	0.8275	1.046	1.221	6474.555
14	8.817	0.00000	40642	0.2100	1.320	1.138	7781.493

试验结果表明，阿莫西林和双氯西林钠主峰分离度均符合要求，理论板数均大于2000，流速增加至1.2ml/min以及乙腈比例增加，两主峰保留时间有所提前，双氯西林钠主峰理论板数增加至6000以上，梯度运行至12min基线平稳。

3.2.P.5.3.6.3进样精密度试验(色谱图见附件1076～1081)

精密称取阿莫西林对照品0.0592g和双氯西林钠对照品0.0278g，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）稀释至刻度，摇匀，作为供试液，取供试液20μl注入液相色谱仪，重复进针6次并记录色谱图。试验结果见下表。

精密度试验结果

进针次数	1	2	3	4	5	6	RSD%
阿莫西林保留时间（min）	3.114	3.086	3.094	3.091	3.115	3.118	0.5
阿莫西林峰面积	14299619	14184091	14162667	14183664	14096544	14124837	0.5
双氯西林钠保留时间（min）	8.698	8.705	8.704	8.700	8.710	8.695	0.1
双氯西林钠峰面积	11657316	11623882	11529543	11454990	11357474	11268283	1.3

试验结果表明，连续测量6次，主峰保留时间和峰面积RSD%均小于2.0%，进样精密度符合要求。

3.2.P.5.3.6.4含量测定线性关系试验(色谱图见附件1082～1086)

精密称取阿莫西林对照品0.0592g和双氯西林钠对照品0.0278g，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3、4、5、6、7ml分别置于10ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）稀释至刻度，摇匀，作为供试液，取上述供试液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

阿莫西林线性关系试验结果

浓度（%）	60%	80%	100%	120%	140%
浓度（μg/ml）	154.3	205.7	257.2	308.7	360.1
峰面积（A）	8353611	11219467	14119578	16824904	19427332

双氯西林钠线性关系试验结果

浓度（%）	60%	80%	100%	120%	140%
浓度（μg/ml）	79.1	105.4	131.8	158.1	184.5
峰面积（A）	7295163	9704301	12048197	14164961	16275670

试验结果经线性回归分析，阿莫西林的浓度在154.3μg/ml～360.1μg/ml，直线方程为y=53931x+117907，R²=0.9995，相关系数r=0.9997，截距为117907，小于100%浓度溶液阿莫西林峰面积的±2.0%（282392），表明线性关系试验符合要求；双氯西林钠的浓度在79.1μg/ml～184.5μg/ml，直线方程为y=85091x+684344，R²=0.9990，相关系数r=0.9995，表明线性关系试验符合要求。

3.2.P.5.3.6.5溶液稳定性试验(色谱图见附件1087～1091)

取本品（规格：0.375g，批号：20110101）细粉0.0429g，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液在室温条件下放置8h，分别于0、2、4、6、8h取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

溶液中阿莫西林稳定性试验结果

放置时间（h）/峰面积
0	2	4	6	8	平均值	RSD
13938821	13900520	13897546	13919668	13880679	13907447	0.2%

溶液中双氯西林钠稳定性试验结果

放置时间（h）/峰面积
0	2	4	6	8	平均值	RSD
11273568	11278077	11275616	11279914	11236201	11268675	0.2%

本品的流动相溶液在室温条件下置8个小时，测得阿莫西林和双氯西林钠的主峰面积的RSD%值均小于2.0%，试验结果表明阿莫西林和双氯西林钠溶液中较稳定。

3.2.P.5.3.6.6回收率试验(色谱图见附件1092～1113)

按80%、100%、120%的份量，各精密称取阿莫西林和双氯西林钠对照品三份，按处方量加入混合辅料约0.021g，混匀，分别用0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，制成浓度各含阿莫西林约为0.20mg/ml、0.25mg/ml、0.30mg/ml和双氯西林钠约为0.10mg/ml、0.12mg/ml、0.15mg/ml的供试品溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

阿莫西林回收率试验测定结果

标示量	加入量(g)	测得量(g)	回收率(%)	平均值（%）	RSD（%）
80%	0.0586	0.0519	101.93	101.3	0.67
	0.0588	0.0519	101.48
	0.0586	0.0517	101.52
100%	0.0728	0.0643	101.62
	0.0732	0.0648	101.91
	0.0729	0.0646	101.94
120%	0.0872	0.0761	100.49
	0.0874	0.0763	100.44
	0.0874	0.0762	100.37

试验结果表明，平均回收率为101.3%，在98.0%～102.0%范围内，n=9，RSD为0.67%，小于2.0%，回收率符合含量测定方法验证要求。

双氯西林钠回收率试验测定结果

标示量	加入量(g)	测得量(g)	回收率(%)	平均值（%）	RSD（%）
80%	0.0276	0.0262	100.20	100.6	1.38
	0.0273	0.0256	99.03
	0.0271	0.0251	97.85
100%	0.0358	0.0343	100.93
	0.0359	0.0345	101.42
	0.0358	0.0344	101.41
120%	0.0426	0.0412	102.10
	0.0428	0.0411	101.27
	0.0428	0.0412	101.60

试验结果表明，平均回收率为100.6%，在98.0%～102.0%范围内，n=9，RSD为1.38%，小于2.0%，回收率符合含量测定方法验证要求。

3.2.P.5.3.6.7重复性试验(色谱图见附件1114～1129)

精密称取本品（规格：0.375g，批号：20110101）细粉6份，分别置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（550:200:250）适量超声使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

重复性试验结果（%）

成分	1	2	3	4	5	6	平均值	RSD
阿莫西林	99.21	99.41	99.60	101.95	102.04	102.17	100.7	1.45
双氯西林钠	101.53	101.50	100.83	99.39	99.20	99.02	100.2	1.17

试验结果表明，重复性试验结果在99.02%～102.17%，RSD%值均小于2.0%，符合重复性试验要求。

3.2.P.5.3.6.8含量测定方法的确定

根据含量方法学试验结果并参照新药转正标准第39册收载的阿莫西林双氯西林钠胶囊质量标准WS₁-(X-194)-2003Z、中国药典2010年版二部收载的阿莫西林原料药及制剂质量标准、国外药典（日本药典JP15、英国药典BP2009、美国药典USP32-NF27）收载的阿莫西林和双氯西林钠原料药及制剂的相关质量标准以及阿莫西林双氯西林钠制剂的含量测定其他相关研究资料（尹利辉，乐健，洪战英，胡昌勤.HPLC法测定阿莫西林双氯西林钠胶囊中阿莫西林和双氯西林钠的含量.药物分析杂志Chin J Pharm Anal 2005,25(11):1395-1398；洪建文，魏雪芳，余彩娣.HPLC法测定阿莫西林双氯西林钠胶囊含量.广东药学院学报2006年6月第22卷第6期:624-626；康丽霞，耿革霞，李冬梅.阿莫西林双氯西林钠分散片的研制及质量控制.河北医药2006年8月第28卷第8期：769-770）。确定本品含量测定方法如下：

照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.1mol/L磷酸二氢钾溶液-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275:275:200:250），用磷酸调节pH值至2.0；流动相B为乙腈；流速为每分钟1.2ml；检测波长为225nm。以下表进行线性梯度洗脱。理论板数按阿莫西林峰和双氯西林峰计算应均不低于2000，双氯西林与阿莫西林的分离度应符合规定。

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	90	10
5	85	15
7	90	10
11	90	10

测定法取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于阿莫西林25mg，双氯西林12.5mg)，置100ml棕色量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿莫西林和双氯西林对照品，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿莫西林0.25mg和双氯西林0.125mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积分别计算出供试品中C₁₆H₁₉N₃O₅S和C₁₉H₁₇Cl₂N₃O₅S的含量。

附件：

阿莫西林双氯西林钠胶囊含量方法学.doc