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主题：【原创】【第四届原创】惊叹！！标准混合液不同配制法的区别！

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发表于：2011/08/17 08:48:49 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被godblesschina设置为精华；

在使用迪马科技的AA有机酸柱子的时候，发现了试验中经常被忽略的问题。现在，把他张贴出来，大家一起讨讨论。

其他的参考以前的帖子：

主题：【原创】迪马科技AAA氨基酸柱子 PK WAters C18柱子
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110422/3265100/

主题：【原创】买了根迪马科技的柱子！！
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110415/3251944/

本人才疏学浅，有的地方说的不是很对，希望大家见谅！

本文旨在促进交流...........

引子：有机酸标准混合溶液的配制

称取草酸50 mg，酒石酸、苹果酸各125 mg，琥珀酸375 mg，柠檬酸250 mg，乳酸、乙酸各100 μL于50 ml三角瓶中，用流动相定容，至刻度线，4℃冰箱冷藏备用。（其浓度为：草酸1mg/mL，酒石酸、苹果酸2.5mg/mL，琥珀酸，7.5 mg/mL，柠檬酸5mg/mL，乳酸、乙酸2uL/mL,根据密度换算成mg/mL比较好）这涉及到浓度的定义：广义的浓度是指一定量溶液或溶剂中溶质的量；习惯上我们使用体积含量及重量含量。

关于混标的贴子都是定性的

用单标定性，用稀释后的已知浓度的单标（母液）定性，确定在你设定的仪器条件下该组分保留时间;可以配置2个不同浓度的单标母液A(高浓度）、B（低浓度），1便于保存，2低浓度的母液B可以继续用于配置工作液，不浪费标液；一定要通过A母液配置B母液；从稀释后的母液B1、B2、B3...等取出液体混合做混标C，可以确定标液中各组分的浓度----一定要遵循逐级稀释原则；

用外标法：需要多配置几个不同浓度的标液C,保证C>C1>C2...，多点校正；此时一定要先配置高浓度的标液C，通过高浓度标液C配置低浓度标液C1，如此类推，配置逐渐低浓度的标液用于制作标准曲线；

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2011/8/17 8:54:39 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

肯定有区别没想到会有这么大

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2011/8/17 8:55:25 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

18种氨基酸混标，溶于0.1mol/l HCl

原产地：欧洲

产品型号：AAS18-10ML

氨基酸标准的选择
1.首先确定的实验目的以及需要测定的品种如果是要测定氨基酸含量，那么使用普通的氨基酸标准品就可以了。如果要进行氨基酸测序，最好使用衍生化的氨基酸标准品。
氨基酸及其衍生物，代谢物品种繁多，如果所有品种全部测定不仅繁琐，而且多数时候是没有必要的。一般来说最主要测定的品种是人体内的18种氨基酸(如下)：
甘氨酸（Gly）
亮氨酸（Leu）
蛋氨酸（Met）
酪氨酸（Tyr）
组氨酸（His）
苏氨酸（Thr）
丙氨酸（Ala）
异亮氨酸（Ile）
色氨酸（Try）
半胱氨酸（Cys）
赖氨酸（Lyb）
天门冬氨酸（Asp）
缬氨酸（Val）
苯丙氨酸（Phe）
脯氨酸（Pro）
丝氨酸（Ser）
谷氨酸（Glu）
精氨酸（Arg）

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2011/8/17 8:56:39 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2.确定检测检测方法，有多种方法可以进行氨基酸的检测，现在国内常用的方法，含量测定主要是：氨基酸分析仪或HPLC；测序使用测序仪。

3.标准品的选择：如果只是测定一种或少数几种氨基酸时，使用单标就可以了。如果测定的氨基酸品种较多，或者测定任务繁重(样本很多），那么使用混标较为合适。
其中有很多客户在选择时会遇到一个问题：混标没有包含所有我所需要的氨基酸！
这可能是两方面造成的：

其一，混标生产厂家不可能将所有的氨基酸混标搭配都生产，只会选择一些大家都会经常使用的品种作为混标品种。

其二，碍于检测方法所限定。一般样本多为蛋白质或者多肽类物质，在测定前要水解成为氨基酸之后才能测定，所测样本都是经盐酸水解成为游离氨基酸后再进行测定，但是酸水解时会破坏色氨酸、胱氨酸、半胱氨酸等几种氨基酸。所经过酸水解的样本可以同时测定苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸。需要测定酸水解会破坏的色氨酸、胱氨酸、半胱氨酸这些氨基酸时一般要对样本进行碱水解或者其他水解，再进行测定。所以一般测定步骤是样本先经酸水解后先测定不被酸分解的氨基酸，然后根据需要再测定酸会破坏的几种氨基酸。所以混标中酸会破坏的氨基酸一般是不会含有的，需要另行购买。

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2011/8/17 8:57:39 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

问题所在：一般文献上都是直接说的是配标准混合液，然后检测(不同菌种的发酵液或者其他液体)，可是标准混合液到底怎么配置？

举例：

氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准品，用 0.1 mol/L HCl水溶液溶解，胱氨酸为0.01 mol/L，酪氨酸为0.02 mol/L，其他氨基酸为 0.05 mol/L

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