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一直以来,蝴蝶、飞蛾等昆虫都是制作标本的热门选择,因为它的翅膀上花纹好看。翅膀上的花纹都是由鳞片组成的,用光镜就够看了(该图片来自于百度) ↓
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对于鳞翅目昆虫来说,其成虫体表被有鳞片和绒毛,其化学成分是碳原子数目不等的烃类,以及高级脂肪酸和高级醇的脂。毒性一般不高,但常会引起过敏和红肿,尤其是小孩。鳞片的主要作用有:防水、脱逃(如被蛛网粘到)、对天敌警戒、种内求偶中的视觉标记、防止体内光活化毒素在光照下毒害自身等。
要研究鳞片的细节,用光学显微镜放大倍数显然不够,于是SEM有了用武之地。
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样品为飞蛾,就是米里面爬出来的那种,随处可见;观察区域为翅膀朝向腹部的那一面;观察方法为低真空,无喷镀;机型为FEI Quanta 250 FEG,热场发射。在比较低的放大倍数下,其反映的细节和光镜基本一致,翅面上为比较短的鳞片,到了翅缘,鳞片变长。
在翅面近中央区域,比较短的鳞片排列紧密 ↓
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相同的位置,相同的低真空,左右半图为不同的加速电压(下皆同)。在不喷金的情况下,因为组成鳞片的元素原子序数比较低,所以高加速电压打得比较透,可以隐约看到好几层。
在短鳞片和长鳞片的过渡区域 ↓
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基本上可以说是短鳞片直接与长鳞片相接,“中长鳞片”非常少。
到了翅缘,就基本都是长鳞片了 ↓
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在短鳞片区(翅中区)任取一鳞片进行放大 ↓
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鳞片的脉络已经比较清楚了。在低加速电压下,可以观察到鳞片中区基本都是盲孔,而鳞片缘区基本都是通孔。这个不知道是不是会有什么实际意义,不过这一细节在高加速电压下很难被观察到。高加速电压下,中间那块比较亮的地方应该是下面还有好几层鳞片信号叠加的结果。
翅中区的鳞片除了短,边缘也比较平缓 ↓
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而翅缘区的长鳞片,边缘就凹凸有致,比较好看了 ↓
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可以将通孔附近的细节继续放大 ↓
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观察到通孔和盲孔之间的区别也就在一层薄薄的膜上,而且对于脉络的还原,也是低加速电压做得更好。
更高放大倍数下 ↓
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再回顾一下观察条件。
如果样品仅仅是用于观察,喷金也许是一个比较好的方法。但是由于该样品结构比较特殊,是松散的层叠结构,即使每个鳞片都喷上了金,也不能保证鳞片和鳞片之间的电荷能够自由流动。因此个人感觉要不就喷非常厚,要不就用非常高的加速电压(>20kV)否则还是有产生荷电影响图片质量的可能性。
如果样品还需要进行接触角等其他实验,喷金就会影响样品的表面成分,毕竟生物体材料的亲疏水性和金属的亲疏水性完全不能相提并论。
综上,低真空配合低加速电压的观察条件,对于该样品的表面细节还原和后续实验,都会更有把握一些。