主题：【第六届原创】药典中的检测方法也应优化

药典中的检测方法也应优化

    柴胡为伞形或狭叶科植物，按性状不同，分为“南柴胡”和“北柴胡”，药物成分主要集中在根部，称为柴胡皂苷，其中柴胡皂苷a、d含量较高，为主要成分。

    柴胡的功效：主治感冒发烧、解热去火、镇静止痛、舒肝和胃、口苦耳聋、头痛目眩、月经不调，抗菌、抗肝损伤、抗病毒，降血脂、降胆固醇等等，药效良好，作用平稳可靠。

    柴胡药效良好，功效多，它的用量很大。它的有效成分的可靠性应当符合要求，所以对其含量的成功检测是非常重要的。

    现在药物检测都是以2010版药典为依据，下面就介绍下药典方法在具体实验中的应用。

实验部分

    先看看药典中是怎么说的。

仪器

高效液相色谱仪（配紫外检测器、二元高压梯度洗脱装置）

电子天平，0.0001g

超声波清洗器

离心机，不低于4000r/min

恒温水浴

回流装置

溶剂过滤器装置

试剂

柴胡皂苷a、柴胡皂苷d标准品溶液

甲醇，色谱纯

乙腈，色谱纯

乙醇，分析纯

石油醚，分析纯

乙酸乙酯，分析纯

正丁醇，分析纯

氨水，分析纯

超纯水或二次蒸馏水

色谱条件

色谱柱： Venusil XBP C18(L) 色谱柱 (250mm×46mm，5μm)

流动相：A：B=乙腈：水

流速：1.0mL/min

波长210nm

进样量：20ul（手动进样阀进样）

柱温：室温

梯度表：

药典梯度表：

    修改梯度表后对照品色谱图：

    这个谱图后面部分有些难看，不过取前30min就好看多了。

    连续进样五次，谱图效果还是相当不错的，和药典中的梯度方法做出的不相上下，两种样品相差不大，定性重复性约0.5%，定量重复性约0.7%。

    效果还不错，分析时间缩短了20分钟。这个我想大多实验室工作人员应该都会心动的吧。    按上述色谱条件对某柴胡供试品溶液测定，色谱图如下：

    这个效果也很好，计算结果也没问题。该梯度洗脱方法完全可以使用。

注意事项：

1.由于各地、各季节的柴胡成分及含量都可能不同，所以针对不同地方或同一地方不同季节的柴胡，检测结果要想准确、可靠，前处理方法和检测条件（色谱条件）都应该做出相应的优化；

2.针对不同的仪器和样品，检测波长可选205-215nm之间的波长，尽量使被测物质具有较好的检测效果（峰形好，灵敏度高），干扰物尽量少（灵敏度低）的波长作为检测波长；

3.针对出峰时间剃度表可做适当的修改，在确保不影响分析效果的前提下，尽量缩短分析时间；

4.有时可以采样等度洗脱方式，如乙腈：水=45:55或50:50或55:45等等，但前提是一定得保证①两种柴胡皂苷主峰的峰形及分离度，②两主峰不受杂质干扰。

5.室温若变化大、不稳定，最好控制色谱柱温度，一般采用柱温箱控制，若柱温箱只有加热功能，温度可以比环境温度适当高一点；

6.有时为了缩短出峰时间及提高分离度（前提是不能影响分析效果），选择更合适的柱子或新柱子，调节温度，改变流速，改变流动相的配比及选择更合适的梯度洗脱方式等操作。

结论

本方法提取测柴胡皂苷a、d方便、简单、快捷，分离度好，分析时间短，结果稳定可靠，可以作为柴胡药材中柴胡皂苷a、d含量测定的方法。参考该方法中的注意事项对该方法进行优化，效果更佳。