黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于药材、谷物、坚果、花生、瓜子、棉籽以及动物饲料等相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药毒性，其中以B1毒性最大。人摄入含有该类毒素物品时，摄入量在身体内是要累积的，不管量大量小对身体都有较大伤害。

近年来，各级食品药品等监管部门不断加大生产流通监管力度，努力保持食药多环节总体质量。现在对乳制品、玉米等食品及食品原料都有相关检测标准，2015版药典也重点明确该项目的检测。

下面我们就一起分享一下高效液相色谱法柱后光化学衍生荧光检测器检测中药材中黄曲霉毒素方法等重要内容。

实验原理

样品经甲醇-水溶解，搅拌、离心及免疫亲和柱层析净化提取，进入高效液相色谱系统，亲水性C18色谱柱分离，经光化学衍生器柱后衍生，紫外检测器检测，外标法计算，即得。

仪器与试剂

仪器：高效液相色谱仪（荧光检测器+等度泵+亲水性C18色谱柱+光化学衍生器等），气控操作架（含气泵），固相萃取装置，黄曲霉毒素免疫亲和柱，高速搅拌仪（搅拌速度大于11000转／分钟），离心机（离心速度4000转／分钟），氮吹仪，超声波清洗器，溶剂过滤器，电子天平等。

试剂：黄曲霉毒素对照品（均为SIGMA标准品），甲醇（色谱纯），氯化钠（分析纯），超纯水等。

样品制备

混合对照品溶液制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2，标示浓度分别为1.0μg/ml、 0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制备为标准品储备液。精密量取储备液1ml，置于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，备用。

供试品溶液制备：取适量被测某药材（或药品）充分粉碎，过二号筛（药典筛），精密称取过筛粉朱15g，加入氯化钠3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液75ml，高速搅拌仪搅拌2分钟，离心机离心5分钟，精密量取上清液15ml，置50ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，微膜（0.45μm）滤过，精密量取续滤液20.0ml，通过固相萃取装置萃取（免疫亲合柱），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用5ml甲醇洗脱，收集洗脱液，氮吹仪吹至近干，用甲醇定容1ml，摇匀，微膜（0.45μm）滤过，待测。

色谱条件

检测器：荧光检测器

色谱柱：C18，5μm，4.6 X 250mm色谱柱

流动相：甲醇：乙腈：水=40：18：42（V：V）

流速：0.8mL/min

柱温：30℃

波长：Ex：365nm Em：445nm

进样体积：对照品5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，供试品20μl

对照品（5μl、10μl、15μl、20μl、25μl）色谱图：

进样0.02ng/ml对照品20μl色谱图:

供试品色谱图：

供试品加标色谱图：

结果

通过以上色谱图大家可以感受到在线光化学衍生的效果，下面还会有介绍。下面以数据说话，检测结果显示：四种对照品在线性范围内相关系数均在0.999以上，定性重复性均小于0.5%，定量重复性均小于0.8%，最小检出限均小于0.02ng/ml，加标回收率均大于90%，可谓效果良好。

结论

该方法检测该药材（药品也可）具有操作方便、简单、灵敏度高、数据准确、可靠等多种优点，实验结果表明该方法适合该药材（多种中药材及药品）检测。

下面再重点说说柱后光化学衍生法的优点。衍生的方法有很多：有柱前的，柱后的，在线的，离线的，其中光化学柱后衍生法优点很多很明显。该方法无需任何化学衍生试剂（避免衍生液伤害实验员及仪器，不用配衍生试剂，省时、省费用等），灵敏度高，色谱峰形漂亮（死体积小，避免样品扩散，具有色谱峰高、窄、漂亮，分离度好等优点），衍生充分、稳定性好，效率高等等多种突出优点。光化学衍生器还具有体积小、功率小、抗干扰能力强、故障率低多种优势。