有效部位指从植物、动物、矿物等物质中提取的一类或数类成分和一种或数种有效成分组成的或仅由一类或数类成分组成的有效部位及其制剂。其有效部位含量应占提取物的50%以上,并对每类成分中的代表成分和组成的有效成分进行含量测定且规定下限,条件许可的也规定上限,有毒性的成分必须增加上限控制。有效部位中药之所以应该得到发展和重视 ,这和它的优势是分不开的：有效部位中药坚持中医药理论的指导,做到中药的基础研究和给药途径、剂型相结合；有效部位中药的药效比传统中药提高,改革后的新剂型,比原有剂型一般在药效上有所提高；疗效确切,服用安全可靠 ,毒副作用低；组成有效部位中药的药物物质基础或药效基础应基本得到明确；具备完善可控的质量标准。

仪器与试药：

对照品1、对照品2、对照品3、对照品4、对照品5均购自中国药品生物制品检定所，中药有效部位片（自制）、乙腈和甲醇均为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

Agilent1200系列快速分离液相色谱仪，包括在线脱气机，四元泵，高性能自动进样器，柱温箱，G1969A 单重四极杆质谱仪，配有 ChemStation色谱工作站；安捷伦6210高分辨飞行时间质谱仪，配有标准电喷雾离子源（ESI），及Masshunter 工作站和AnalystQS 质谱分析软件；SB3200-T 超声发生器；METYLER AE240型十万分之一电子天平。

TOF/MS质谱条件

采用ESI离子源，考察了质谱条件毛细管电压，雾化气压力，干燥气流速及干燥气温度等对质谱响应的影响，正离子模式下选择性、灵敏度及检测信号等优于负离子模式，最终确定质谱分析参数如下：正离子模式下（ESI+）：毛细管电压4000V，雾化气压力40psi，干燥气流速10L/min。，干燥气温度 350℃，碎片碰撞电压范围 100～425 V；；质量数扫描范围 m/z 100～1500。色谱柱：Agilent Zorbax XDB-C18(2.1×50mm，1.8μm)；流动相：A相为水（0.1 %甲酸），B相为乙腈，梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：0～10 min, 5～23% B; 10～20 min, 23～23% B，20～25 min, 23～45% B; 25～30 min, 45～95% B；进样量：1μl；进样前以流动相梯度初始条件平衡10 min；流速：0.2 mL·min-1，柱温：25℃；运行时间30 min。

对照品储备溶液的配制：

精密称取对照品1 5.80mg，置于 10ml容量瓶中，用70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备液。分别精密量取适量储备液，用70%乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，配成浓度为 185.60 μgml-1、92.80 μgml-1、46.40 μgml-1、11.60μgml-1、2.90 μgml-1的对照品溶液。

精密称取对照品2 5.16mg，置于 10ml 容量瓶中，用 70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备液。分别精密量取适量储备液，用 70%乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，配成浓度为 82.56 μgml-1、41.28 μgml-1、20.64μgml-1、10.32μgml-1、2.58 μgml-1的对照品溶液。

精密称取对照品3 6.97mg，置于 10ml 容量瓶中，用 70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备液。分别精密量取适量储备液，用70%乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，配成浓度为 446.08 μgml-1、223.04 μgml-1、111.52μgml-1、27.88μgml-1、6.97 μgml-1的对照品溶液。

精密称取对照品4 6.64mg，置于10ml 容量瓶中，用70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备液。分别精密量取适量储备液，用70%乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，配成浓度为212.48μgml-1、106.24 μgml-1、53.12μgml-1、13.28μgml-1、3.32 μgml-1的对照品溶液。

精密称取对照品5 5.40mg，置于 10ml容量瓶中，用70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备液。分别精密量取适量储备液，用70%乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，配成浓度为172.80μgml-1、86.40μgml-1、43.20μgml-1、10.80μgml-1、2.70μgml-1的对照品溶液。

方法学考察

线性关系考察

精密吸取知1-5对照品储备溶液至容量瓶中，加水至刻度，摇匀，按规定的色谱条件实验，记录峰面积，以浓度为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，结果见表（1-5分别为）：

系统适用性

理论塔板数以化合物1计算大于14000；以化合物2计算大于14000；

以化合物3计算大于15000；以化合物4计算大于25000；以化合物5

计算大于60000。

样品含量测定：

取中药有效部位片粉末，制备样品溶液，测定5种有效成分的含量，每份供试品溶液重复测量3次，取其平均值作为有效部位片的成分含量。

结果与讨论：

1、对于梯度条件的研究，曾进行了大量的实验，，同时在LC-MS中也进行了预实验，结果表明，此流动相系统和色谱条件能够满足要求。

2、流动相在离子化过程中起着很重要的作用，因此我们考察了流动相的组成和比例。我们尝试了甲醇和水以及乙腈和水分别作流动相，并尝试不同比例，结果发现用乙腈和水做流动相时质谱中相应比较好，可能乙腈和水做流动相能够促使[M+H]+形成。

3、质谱条件的优化：为了优化质谱条件，正负离子模式我们都做了尝试，实验表明正离子模式好些，同上面的分析一致。流动进样分析后我们得到了优化后的实验参数，其他参数在实验过程中继续优化。化合物[M+H]峰的强度可能依赖于源内裂解的电压，所以电压是影响灵敏度的主要因素。我们用标准液考察了从50到100V的电压。五种化合物的准分子离子峰在70V的时候丰度最大，最终我们确定电压为70V。

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主题：【第七届原创】中药有效部位新药5个主要成分的含量测定方法