实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8042183今日发帖：490 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
液相色谱（LC）
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【讨论】【峰谜解读】这样的色谱峰有点想不通（已更新）

浏览0 回复38 电梯直达
一片枫叶
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2015/03/17 12:36:38 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在相同的检测条件下，分别进不同PH的流动相成分，其峰型有着很大的差别。注：流动相以及进样的PH都是用磷酸调整，柱压平稳，检测器及色谱柱是正常检测使用的
检测器：UV检测器，
流动相：乙腈/水=1/4，
波长：200nm ，
流速：1.00ml/min 。
请各位盆友分析讨论一下：
1：下图中同种成分出峰差别的原因是什么？
2：在液相色谱分析中，应注意什么问题？
3：有意思的是：PH=2和PH=4的进样。保留时间在1.05min时，出现的正峰，并且峰高随PH增大，峰高变小；而在保留时间为2.6min时却为负峰。
                            PH=6的进样，保留时间在1.05min时，出现的负峰而在保留时间为2,6时却是正峰。
到底是什么秘密呢？

出现倒峰的原因：（资料汇总，分享学习）
1.常为溶剂峰,流动相的紫外吸收大于样品的溶剂的紫外吸收,就产生倒峰.
2.样品中的杂质没有紫处吸收或吸收很小,而流动相紫外吸收大,如用甲醇时波长设定在220nm以下时,常出现这种现象.
3.进样过程中进入了空气也会导致的.
4.如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，会产生倒峰，必须用高纯度的溶剂作为流动相。
5.检测器的极性接反了，也会出现倒峰。
第一，用的是什么检测器？如果是示差折光，那很正常；
第二，倒峰在什么位置？如果是溶剂峰，也很正常，要去除的话，溶剂改用流动相；
第三，如果是紫外检测器（MWD,OR DAD）,有没有加参比波长？如果有，去掉参比波长或另选合适的参比波长；
第四，如果是紫外检测器，流量池里是否有气泡产生？1.抽滤或超声去除流动相里的气泡；2.检查在线脱气机（如果有的话）；3.调节背压；
第五，流动相是否在该波长（用紫外检测器的话）有较大的背景？1.检查你用的溶剂的等级；2.检查色谱条件的合理性。
第六：参比波长设置的问题，试着换个参比波长看看
多半是因为样品的ＰＨ值与流动相的ＰＨ值不一致造成的，解决办法：加大盐的浓度，用流动相溶解样品即可．
流动相背景吸收波长低于检测波长
1.    组分的吸收小于流动相的背景吸收，可能原因是流动相中加入截止波长较大的成分或波长选择不合适
2.二极管阵列检测器中参比波长处吸收大于组分吸收；
１、首先确定是还是柱还是检测器的问题：换下柱看是否仍存在倒峰，如果不行再换检测器，以确定是否检测器或者柱的问题。或者什么都不要换单纯换个其他化学成分，看是否是因为你的样品存在问题。
2、如果都做了，还是不行，就考虑是否流动相问题，一般DAD存在有规律倒峰的现象，如果倒峰只是跟着你的主成分走，这样你可以首先进个空白溶剂样品，看是否还有倒峰存在，如果空白样品没有倒峰那么就是你样品问题，你样品处理是否有问题，
一般液相对流动相的PH控制在大概2.5-7.5范围，如果过酸或过碱会导致填料被破坏引起成分在柱上的洗拖保留发生变化而导致规律倒峰出现也有可能，测下您的流动相PH以保证这个没问题。样品中残留的一点酸或碱应该没问题，因为酸碱在柱上基本没有保留，且量小应该没影响

倒峰的出现，有可能是色谱柱的残余硅羟基所致，同一个色谱条件，分别用非端基封尾柱和端基封尾柱考察，前者即便是进流动相也会出现负峰，后者则没有，推断应为残余硅羟基对进样样品中的部分离子造成吸附，使进样部分的液体与流动相产生差异，由于溶质离子经过检测器时，紫外吸收信号减小，所以形成负方向的色谱峰。
1.样品引入
2.样品与流动相反应所致
3.检测条件不合适,建议换二极管阵列查找
4.外部引入的污染
    最后一点几率很小,但也会存在的,就是仪器设备的系统误差
该帖子作者被版主 夏天的雪加 10积分， 2经验，加分理由：活动奖励
为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
老多_小多
emoc98311
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/17 12:47:22 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我认为200nm测定有很大影响，同样的色谱图，估计换个254，也许会完全不一样
该帖子作者被版主 v2960432加 2积分， 2经验，加分理由：参与讨论
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
orange85
v2989356
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/17 13:28:39 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对pH，首先要注意色谱柱的pH使用范围，这是色谱柱使用基本保护；
从谱图上看，pH为4时和流动相接近，所以色谱图好点，但也有好多峰啊，可能是色谱柱有关系，如果是脏了，得好好冲冲柱子。
该帖子作者被版主 v2960432加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
夏天的雪
bingwang228
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/17 20:54:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1，低波长检测时流动相或者样品中的杂质可能被检出，显得杂质比较多，2，ph越低1.05min时的峰越高怀疑与加入的磷酸有关，3，后面倒峰的出现可能也和磷酸含量有关，之前有过误操作，测乙酸含量时用乙酸调了ph值结果出现负峰
该帖子作者被版主 v2960432加 2积分， 2经验，加分理由：参与讨论
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
vm88
v2826867
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/18 15:36:49 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
出负峰与PH有关系吗？
该帖子作者被版主 v2960432加 2积分， 2经验，加分理由：感谢参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
武灵
zhonghuashendun
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/18 18:38:17 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.05min处是否应该理解为死时间出的峰？
该帖子作者被版主 v2960432加 2积分， 2经验，加分理由：参与
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
一片枫叶
v2960432
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/18 19:11:34 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 武灵(zhonghuashendun) 发表:
1.05min处是否应该理解为死时间出的峰？
死时间出峰正负怎么理解呢？
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
2015/3/18 21:00:25 Last edit by v2960432
一片枫叶
v2960432
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/18 19:14:19 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
我认为200nm测定有很大影响，同样的色谱图，估计换个254，也许会完全不一样
254nm的波长是能够得到解决的。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
2015/3/18 21:01:20 Last edit by v2960432
一片枫叶
v2960432
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/18 19:19:54 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 orange85(v2989356) 发表:
对pH，首先要注意色谱柱的pH使用范围，这是色谱柱使用基本保护；
从谱图上看，pH为4时和流动相接近，所以色谱图好点，但也有好多峰啊，可能是色谱柱有关系，如果是脏了，得好好冲冲柱子。
色谱柱的因素是要考虑，进样组分与流动相组分的PH值差异，造成进样组分在固定相与流动相之间吸附与脱吸附的瞬间改变致使产生了正负峰应该是主要原因。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
2015/3/19 12:43:17 Last edit by v2960432
一片枫叶
v2960432
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/18 19:23:34 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
1，低波长检测时流动相或者样品中的杂质可能被检出，显得杂质比较多，2，ph越低1.05min时的峰越高怀疑与加入的磷酸有关，3，后面倒峰的出现可能也和磷酸含量有关，之前有过误操作，测乙酸含量时用乙酸调了ph值结果出现负峰
固定不变的峰可能是进样组分的低波长杂质峰。正负变化的峰应该是其它原因引起的峰吧。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
2015/3/18 21:05:44 Last edit by v2960432
一片枫叶
v2960432
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2015/3/18 19:30:51 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 vm88(v2826867) 发表:
出负峰与PH有关系吗？
不同的PH值有着不同的极性，不同极性的进样组分在色谱柱中，可能会造成吸附与解吸附短时间的变化，反映到检测器上可能就出现了正负峰。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
2015/3/18 21:07:06 Last edit by v2960432
手机版： 【峰谜解读】这样的色谱峰有点想不通（已更新）
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁