主题：【原创】Ultimate XB-C18的应用----大豆异黄酮含量的测定

大豆异黄酮是一种植物性雌激素，又称为植物动情激素，是一种天然荷尔蒙，被认为有防癌丰胸之效，目前几乎没有明显副作用的报告。这个东西可防治一些和雌激素水平下降有关的疾病，延缓女性衰老、改善更年期症状、骨质疏松、血脂升高、乳腺癌、前列腺癌、心脏病、疏松症、心血管疾病等。对于高雌激素水平者，表现为抗激素活性，可防治乳腺、子宫内膜、结肠、前列腺、肺、皮肤等癌细胞的生长和白血病，及其它心血管疾病。其性状为：浅黄色粉末，气味微苦，略有涩味。来源于大豆类植物的胚芽，主要成分有：大豆甙(Daidzin)，大豆甙元(Daidzein)，染料木甙(Genistin)，染料木素(Genistein)，黄豆黄素(Glycitin)，黄豆黄素甙元(Glycitein)。
1 材料与方法
1. 1 仪器与试剂
1. 1. 1 仪器Waters2695高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器和Empower 色谱工作站; 脱气泵( 美国Millipore 公司) ; 超纯水系统( 美国Millipore公司) ; CW － 2000 超声波萃取仪(上海) 。
1. 1. 2 试剂大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素对照品由美国Sigma 公司生产; 甲醇为色谱纯( 美国Fisher 公司) ; 乙醇、丙酮均为分析纯( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ，磷酸为优级纯( 天津市化学试剂三厂) ; 实验用水为超纯水。
1. 2 方法
1. 2. 1 色谱条件
色谱柱：Ultimate XB-C18  4.60×250mm,5 um .PartNumber 00201-31043Serial Number 211302350.检测器: 二极管阵列。检测波长: 254 nm。流动相: 1% 磷酸水溶液和甲醇采用梯度洗脱，洗脱程序如下: 0 ～ 4 min，70% 磷酸水溶液+30%甲醇; 14 ～ 24 min， 45% 磷酸水溶液+55% 甲醇; 25～ 30 min，70% 磷酸水溶液+ 30% 甲醇。柱流速: 1. 0 ml /min。柱温: 30℃。进样量: 10μl。
1. 2. 2 标准曲线制作
1. 2. 2. 1 标准溶液配制 单标标准储备液配制: 准确称取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素对照品各0. 0500 g，分别置于小烧杯中，加70%乙醇溶解，如果不好溶解，可以在超声波中超声加速溶解，或者加入少量丙酮也可以加速溶解，待溶解完全后，移入50 ml 容量瓶中，加70% 乙醇定容至刻度，混匀，此溶液作为单标储备液，浓度各为1. 0 mg /ml。混合标准储备液配制: 准确吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素单标储备液各5. 0 ml 于50 ml 容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，混匀，此混标溶液6 种成分浓度各为100 μg /ml。
1. 2. 2. 2 标准工作曲线制备 准确吸取混合标准储备液2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 ml 分别于100ml 容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，混匀，6种成分的浓度各为2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 μg /ml，按1. 2.1 色谱条件进行测定; 以各组分浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，得回归方程。
1. 2. 3 样品测定
1. 2. 3. 1 样品前处理 固体样品: 准确称取2. 0 g样品于100ml 容量瓶中，加入50 ml 70% 乙醇超声波提取30min，加70%乙醇定容至刻度，混匀， 0. 45μm 滤膜过滤后，供高效液相色谱测定用。液体样品: 准确吸取5. 0 ml 样品于100 ml 容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，混匀，0.45 μm滤膜过滤后，供高效液相色谱测定用。

1. 2. 3. 2 样品测定 吸取样品处理液及标准溶液各10 μl，按1. 2. 1 色谱条件进行测定，以标准保留时间定性，峰面积外标法与标准系列比较定量。